以桦木为载体用柠檬酸和次氯酸钠对口蹄疫和非洲猪.docVIP

以桦木为载体用柠檬酸和次氯酸钠对口蹄疫和非洲猪瘟病毒进行消毒 皮特W.库克a, 克里斯托弗R.拉森a,b, 安琪莉可C.伊萨姆a,b, 路易斯L.罗德里格斯b a:美国农业部，动物疾病研究所,农业服务研究所,李子岛动物疫病中心, 格林波特iBoone and Gerba的观点，2007年）。Grubman and Baxt, 2004)）。在一定程度上是由于其在环境中有超强的生存能力。特别是在污染物中 (Bartley et al., 2002)。(Hartnack 等, 2008)，禽流感(Lombardi 等, 2008; Tiwari 等, 2006).口蹄疫病毒株A24是由BHK - 21细胞生成的（ATCC＃CCL- 10）。存在破坏性的细胞病变效应2到3天可以确定感染了口蹄疫病毒。Manuel Borca 博士发现了猪瘟病毒布雷西亚株和猪肾细胞SK6株(PIADC)。非洲猪瘟病毒BA71/ V株是从PIADC病毒库和种植Vero细胞获得的（ATCC - 81＃）。如前所述产生高滴度的病毒库（Krug等人，2011年）。在美国联邦条例第9标题121部分中,所有病毒的工作是在3-Ag水平的限制下根据APHIS法规选择代理。。 2.2 消毒剂和中和剂 平均值为10.75，标准差为0.06的千分之一的次氯酸钠，中和2倍的巯基溶液培养基（FTM，DIFCO）。其他测试的次氯酸钠浓度（1500 ，pH值10.940.072000 ，pH值11.10.02）被含有1倍 和2倍流体巯基肉汤所中和（FTB，Fluka公司化工）。平均pH值为7.16±0.09。用无菌蒸馏水做中和剂，所有消毒剂在碳酸钙里稀释400 。在硬水条件下模拟最坏的条件下，2.3消毒检测此协议是对ASTM 标准的修改：标准方法是在无生命的环境下测试表面消毒的疗效(ASTM, 1997)，sattar等进行了减少了载体数量的测试方法（2003年），简单地说，100微升高低度病毒，稀释在一倍的磷酸盐缓冲液中。(Fisher Scientific )。每个病毒株以1%(v/v);的浓度稀释至与已存在的小牛血清达到最终的平衡；在试验中未添加多余的有机负载。为了干燥病毒，把样品放在一个生物安全柜的背面，通过层状气流和点火的温度环境下。干燥后的病毒悬液（60 - 90分钟，取决于环境湿度），把桦树样品暴露在1毫升的次氯酸钠或柠檬酸中，置于在一个恒定在22℃温度细菌培养器里.（CCID50） (Hierholzer和 Killington, 1996)要确定病毒在没有消毒的情况下复活，每个实验中接触时间最长干燥病毒的桦木单板样品暴露含有三辛胺预混中和剂和消毒剂中，接触时间最长在实验用相同的方法进行处理。使用这种病毒恢复控制在每个实验的0分钟接触时间点，保证增加的中和剂和消毒剂中没有病毒的存在。2）以确保有效中和，未接种病毒的花木样品与消毒剂和中和剂混合后一起培养。这些阴性对照用处理消毒样品的方式进行处理。在同一块金属板上细胞培养液接种在负控制上和未感染的相比。实验显示细胞毒性的可是效果，但不包括数据分析。无孔表面消毒的ASTM标准被修改为使用一小块桦木单板表面样品。一个衡量消毒检测的公认数据是在4-log下观察病毒复苏的减少量（美国环保局，1981年）。考虑到消毒检测中所描述的最低检测限度是1.1 。病毒干燥后恢复最小效价5.1 CCID50/ml，必须能够测量EPA建议要减少的4-log效价。为了确保足够的病毒可恢复，在可控制的条件下达到这个标准 、，口蹄疫、非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒在桦木样品上干燥，用描述的方法进行提取。表一显示了桦木表面上病毒干燥的得效果。单独干燥时口蹄疫的活性最低(下降1.8 log10)，其次是非洲猪瘟病毒(下降2.5 log10)，然后是猪瘟病毒（下降3.7 log10)。平均回收率口蹄疫是(7.0 log10 CCID50)和非洲猪瘟病毒(5.8 log10 CCID50)，对消毒实验来说已经足够了。由于猪瘟病毒的平均回收率只有3.9 log10 CCID50, 木材表面的消毒实验进一步研究将不再包括这一病毒。 接下来，干燥的桦木上测试口蹄疫病毒和非洲猪瘟病毒消毒效果。表一显示了用2％的柠檬酸（A）或千分之一的次氯酸钠（B）消毒口蹄疫和非洲猪瘟病毒一段时间的效果。4 log10时，作用20分钟能够有效减少非洲猪瘟病毒和口蹄疫口蹄疫病毒。然而千分之一的次氯酸钠作用30分钟达不到上述效果。使用这两种消毒剂，在5到10分钟病毒的恢复效果明显。经过这段时间，柠檬酸作用25分钟（口蹄疫病毒）或30分钟（非洲猪瘟病毒病毒），病毒的减少继续失活有低于检测限度的趋势（图1A）。然而，次氯酸钠以同样的速度增强灭活的能力是有限的。如下所示1