03 细胞生物学研究方法课件.pptVIP

第三章 细胞生物学研究方法 显微技术 生物化学与分子生物学技术 细胞培养 一、显微观察中的几个参数 放大倍数：成像大小与原物体大小比值。 分辨率（分辨力）：指分辨物体最小间隔的能力。 样品的反差情况：被观察结构与其背景对光吸收的差别程度。 光的干涉 分辨率——取决于光源波长λ、物镜镜口角α和介质折射率N 二、光学显微镜： 以可见光（或紫外线）为光源。 样品制备 固定 样品保持在原始状态。 包埋 石蜡或树脂包埋 切片 制成薄片 染色 提高对比度。 2. 活细胞观察 相差显微镜（P. Zernike，1932） ： 物镜后装有相差板，根据细胞内容物的折射率不同来增加样品反差。 微分干涉显微镜(1952,nomarski）：平面偏振光，增加样品反差。 将直射光和物体衍射的光分开； 使两束光相互干涉，使物体呈现明暗对比，因而能够辨认无色透明物体。 3 荧光显微镜 (1941,Coons） fluorescence microscope 光源和样品之间加上激发滤光片。 物镜和目镜之间装有阻断滤片。 免疫荧光染色及荧光放大技术 用于特异蛋白在细胞中的定位研究； 根据抗原抗体的特异性结合特性。 多荧光染色技术 4 激光共聚焦扫描显微境 Laser confocal scanning microscope 用激光作光源