实验三 蛋白质的两性解离和等电点测定课件.pptVIP

实验三 蛋白质的两性解离和等电点测定 一、实验目的 了解蛋白质的两性解离性质。 学习测定蛋白质等电点的一种方法。 2、实验原理 蛋白质由许多氨基酸组成，虽然绝大多数氨基与羧基成肽键结合，但是总有一定数量自由氨基与羧基，以及酚基、巯基、胍基、咪唑基等酸碱基团，因此蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。 调节溶液的酸碱度达到一定的氢离子浓度时，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态存在，在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动，也不向阳极移动，这时溶液的pH值，称为该蛋白质的等电点（pI）。当溶液pH低于蛋白质等电点时，即在H+较多的条件下，蛋白质分子带正电荷成为阳离子；当溶液pH大于等电点时，即在OH—较多的条件下，蛋白质分子带负电荷，成为阴离子。 蛋白质溶液的pH在等电点时，蛋白质的溶解度、粘度、渗透压、膨胀性及导电能力均最小，胶体溶液呈最不稳定状态。 凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点往往偏碱，如组蛋白和精蛋白。反之，含酸性氨基酸较多的蛋白质如酪蛋白、胃蛋白酶等，其等电点往往偏酸。 不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。 3、实验材料 水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL容量瓶、乳钵（准备实验用具） 4、操作步骤 （1）取同样规格的试管4支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀。（要求各试剂的浓度和加入量相当准确） （2）向以上各试管中加酪蛋白醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管，此时1、2、3、4管的pH值依次为5.9、5.3、4.7、3.5，观察其混浊度。 5、实验结果 静置10min后，再观察其混浊度，最混浊的一管的pH即为酪蛋白的等电点。 * * 本实验借观察在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。 用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制成各种不同pH值的缓冲液，向诸缓冲溶液中加入酪蛋白，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。 吸管、试管、试管架 0.4%酪蛋白醋酸钠溶液 1.0mol/L醋酸 0.1mol/L醋酸 0.01mol/L醋酸溶液 1.6 — — 7.4 4 — 1.0 — 8.0 3 — 0.3 — 8.7 2 — — 0.6 8.4 1 1.0mol/L醋酸（ml） 0.1mol/L醋酸（ml） 0.01mol/L醋酸（ml） 蒸馏水（ml） 试管号 *