张亚平,蛋白质组技术课件.pptVIP

--周有文、张亚萍 什么是蛋白质组？ 主要方法 蛋白质分离技术 凝胶双向电泳、HPLC； 蛋白质鉴定技术 Edman 测序、质谱技术； 图像分析与生物信息 图像分析软件，数据库； 相互作用研究技术 酵母双杂交技术、免疫共沉淀、蛋白质芯片等。 双向凝胶电泳 一、双向凝胶电泳的原理 二、双向凝胶电泳技术操作的基本过程 三、双向凝胶电泳过程中需要注意的问题 （一）、双向凝胶电泳的原理 等电聚焦（Isoelectric focusing, IEF） 蛋白质是两性电解质 在等电聚焦中蛋白质总是向与其等电点相同的pH位置移动并停留在此位置上 等电点相同的蛋白质都聚焦在与等电点相同的pH位置上 SDS十二烷基硫酸钠（SDS）是一种阴离子去污剂 ，带大量的负电荷 SDS与蛋白质结合，其所带负电荷大大超过蛋白质所带电荷量，消除了不同蛋白之间所带电荷的差异 SDS中，蛋白质迁移率只与蛋白质的分子量有关 先根据蛋白质的等电点不同，利用等电聚焦进行第一向分离，将等电点相同的蛋白质集中在与等电点相同的pH区 再以与等电聚焦成90度角的方向进行SDS第二向分离，将等电点相同的蛋白质再按分子量大小彼此分开 以此将复杂蛋白混合物中的蛋白质在