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生物样品前处理、制备、分离及保存器材 中国刑警学院法医系 2.2.2细胞破碎相关的器械与器材 电动组织捣碎机 原理:用可调速电机驱动捣碎转子(头)在高速旋转下将组织打碎达到匀浆目的。 市售仪器多数是可调速机型,有不同口径、头端式样的转子供选择,平头转子适于制备乳浊液及悬浮液,锯齿状转子适于制备组织和含纤维物质的匀浆。 电动组织捣碎机 应用:一般用于动物组织,植物肉质种子,柔嫩的叶、芽等材料。国产的捣碎机最高转速可达1-2万转/分,因旋转刀刃的机械切力很大,制备较大分子样品很少使用。动、植物细胞30-45秒完全破碎,酵母菌和细菌需加入石英砂加强效果。 2)超声波细胞破碎机 超声波细胞破碎机 原理:仪器发出一定频率的超声波产生振动力破碎细胞壁和细胞器。由超声波发生器和超声换能器两部分构成。 相应超声换能器的长度及尖端口径也可挑选不同长短、粗细,以满足0.1~250ml的容量需要。 超声波细胞破碎机 应用:用于各种动植物细胞、病毒细胞、细菌及组织的破碎,也可用于各类高分子物质的破碎,同时可用来乳化、分离、匀化、提取、消泡清洗及加速化学反应等。 超声波细胞破碎机 使用注意事项: 1.长时间运转将产生过热,注意降温,可采用间歇处理方法(10-30秒)和冷却夹套选件。 2.仪器发出的超声波是在液体中传递能量的,所以要保持超声换能器在液体中方能开机,避免在非液体环境中空转。 3.使用后,须用蒸馏水冲洗净换能器头端。 4.可能损伤细胞器,尤其是真核细胞的细胞器。 3)加压细胞破碎机 原理:利用高压使细胞悬液通过一个小孔(小于细胞直径的孔径)致使细胞被挤破、压碎,特别适用于厚壁细胞、细菌和较浓样品的破碎,具有快速、方便、无噪声的特点。 主要技术参数电压:380V最大破碎压力:300Mpa 3. 过滤及超滤装置 3.1 过滤 原理:利用多孔介质阻留固体或大于多孔 介质孔径的分子而让液体通过,使固体和液体分离的方法。 目的: 1)去除不溶性杂质得到所需要的清液 以供进一步实验。 2)收集固体中间产物或结晶成品。 3.1.1 过滤所需器材: 滤膜(滤纸)、漏斗、滤瓶,加压、减压过滤需外配气泵、蠕动泵、真空泵,并不涉及复杂的器具。 3.1.2 影响滤过的因素 1.液体的粘滞度:粘滞度大,则滤速慢;粘滞度随温度升高而降低,故升温可加快过滤速度。 2.滤膜的材料、材质:如滤纸、滤布、玻璃纤维、石棉板、多孔陶瓷滤板等,其毛细管越长,管径越小或数目越少,则过滤速度越慢。 3.压差:压差越大,过滤速度越快。 4.滤渣:滤渣越厚,过滤速度越慢。 5.过滤液性状:过滤液中有沉淀、胶状物或其它可压缩的物质,均能造成滤膜孔堵塞,减慢过滤速度。 3.1.3 提高过滤速度的常用方法 1.选择适当的过滤介质 应考虑:①孔径大小应适于截流被分离的固体颗粒,孔径过大,则滤液不清,过小则滤速慢。②孔的数目多,孔道短且直,则滤速快,否则滤速慢。③耐酸碱,化学稳定性好。④有一定机械强度,易于回收。⑤使用寿命长,成本低。 过滤介质的材质: ①棉、麻、丝织品; ②玻璃纤维、垂熔玻璃、石棉或烧瓷滤板、涤纶等; ③滤纸(工业用和分析用,慢速、中速、快速),实验室里最常用。 2.加助滤剂。如硅藻土、活性炭、细砂等。 3.增加过滤推动力。常压、加压、减压。 加压和减压过滤在过滤介质的下面都必须有支持滤板,如强度较大的烧瓷滤板等。 4.提高过滤时的温度。以减少溶液粘度,增大溶质的溶解度,但不适于热敏物质。 5.离心过滤法,利用离心力促使滤液通过过滤介质,适于分离小量组织样品。 超滤 原理:超滤是一种加压膜分离技术,即在一定的压力下,使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜,而使大分子溶质不能透过,留在膜的一边,从而使大分子物质得到了部分的纯化。 超滤技术 优点: 操作简便,成本低廉,不需增加任何化学试剂,尤其是超滤技术的实验条件温和,与蒸发、冰冻干燥相比没有相的变化,而且不引起温度、pH的变化,因而可以防止生物大分子的变性、失活和自溶。 应用: 在生物大分子的制备技术中,超滤主要用于生物大分子的脱盐、脱水和浓缩等。 超滤法也有一定的局限性,它不能直接得到干粉制剂。对于蛋白质溶液,一般只能得到10~50%的浓度。 超滤技术 超滤装置由若干超滤组件构成。分为板框式、管式、螺旋卷式和中空纤维式四种主要类型。 由于超滤法处理的液体多数是含有水溶性生物大分子、有机胶体、多糖及微生物等。这些物质极易粘附和沉积于膜表面上,造成严重的浓差极化和堵塞,这是超滤法最关键的问题,要克服浓差极化,通常可加大液体流量,
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