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细菌培养 基础操作 主讲人：李前 细菌培养的意义 标本的采集 接种方法介绍 菌落鉴定 药敏试验 细菌培养意义 细菌培养是在无菌条件下，对来自病人的标本（采取病人少许的血液、排泄物、分泌物、呕吐物、体液和脱落细胞等样品 ）在合适培养基上进行培养，分离出致病菌，进行药物敏感性试验，进而指导临床用药。 标本的采集 血液标本的采集 血培养是把静脉穿刺获得的血液接种到一个或多个培养瓶或培养管中，用来发现、识别细菌或其它可培养分离的微生物（如大肠杆菌(Escherichia coli)、念珠菌属、霉菌属等），这些微生物存在于血液中形成菌血症或真菌菌血症。在病人的血液中检测出微生物对感染性疾病的诊断、治疗和预后有重要的临床意义。 成人每次采血5—10ml，小儿采血2—3ml，严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。及时送检。 痰、尿、粪便标本的采集 1.令患者早上起床后用清水濑口，不要刷牙，立即从下部呼吸道咳出第一口痰，吐在无菌密闭塑料痰盒中，及时送检。 2.先准备无菌封闭尿杯，清洗外阴，留取中段尿5—10毫升，及时送检 3.取有粘液、脓血部分的粪便置玻璃大便专用管中，如为稀水便，可直接收集于玻璃管中 标本的采集 标本的采集 其它标本的采集 除上述四种标本外，还有伤口分泌物、脓液和脑积液等标本亦可进行细菌培养，需保证标本采集和保存的无菌。其中脑脊液可按血液标本方法操作。 接种工具 酒精灯、接种环、加样器、棉棒、培养板等 接种方法 四、点击添加标题 接种方法 2.接种环境 接种罩、无菌工作室、超净工作台 接种方法 细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、斜面接种法、液体培养基接种法。 根据样本形态和目的用途，选取合适的接种方法。 接种方法 1.涂布法 先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌L型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。 优点：可以计数，可以观察菌落特征。 缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。 接种方法 2.倾倒法 吸取1ml菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。 优点：可以计数，较方便。 缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征，不适用于严格好氧菌和热敏感菌。 接种方法 3. 斜面接种法 用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来移种的菌落。伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。 主要用于纯种移植，以进一步鉴定或保存菌种。 接种方法 接种方法 4.液体培养基接种法 用灭菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。可观察到细菌不同的生长现象 接种方法 接种方法 Click to add title 5.半固体穿刺接种法 可用于保存细菌和观察细菌动力 接种方法 Click to add title 说明性文字 接种方法 6.划线法 接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。 ? 优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。 ? 缺点：不能用于菌落计数 接种方法 一、分区划线分离法 此法常用于含菌量较多的标本如痰、伤口分泌物和粪便或混合细菌的分离。 1、右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，挑取培养物少许。 2、左手斜持琼脂平板，皿盖留在桌上，于火焰近處將菌涂于瓊脂平板上端，來回划线，涂成薄膜（约占平板总表面积的十分之一），划线时接种环与平板表面成30~40o角，轻轻接触，以腕力在平板表面行轻快地滑移动作，接种环不应划破培养基表面。 接种方法