端粒相关酶CDC13综述.docxVIP

综述：Cdc 13的结构、功能及其同功蛋白简介摘要：Cdc 13是在酿酒酵母细胞（Saccharomyces cerevisiae）中发现的一种端粒单股接合蛋白，具有募集端粒酶复合体，保护染色体及调节端粒长度的作用，同时为细胞周期顺利进行做准备。关键词：Cdc 13，端粒，DBD，CST，Shelterin，hPot 1Cdc 13是在Saccharomyces cerevisiae中发现的，具有和端粒序列单链部分TG1-3特异性结合能力的蛋白质。与原生动物纤毛虫（Oxytricha nova）中发现的Tebp（telomere end-binding protein）、脊椎动物中的Pot1（protection of telomeres 1）以及人类hPot1（human protection of telomeres 1）等端粒结合蛋白功能相似，参与端粒的维持与细胞周期的调控。其包含942个氨基酸，大小约为104895Da。Cdc 13结构及与单链DNA（ssDNA）的结合在Saccharomyces cerevisiae中，端粒是由大约300bp的C1-3A/TG1-3双链DNA和一3’单链DNA组成，序列上具有重复性。Cdc13通过寡核苷酸结合折痕区域（OB-fold）功能位点与3’ssDNA结合，形成Cdc 13DNA-binding domain（DBD）/ssDNA复合物。Rachel M. Mitton-Fry等人确定了这一复合物的结构[1]。如图1，2图1Cdc 13-DBD/ssDNA立体图像。深蓝色为β-折叠，淡蓝色为α-螺旋，灰色为环状区域。红色为DNA(dGTGTGGGTGTG)。图2，A，品红色的为大β2-β3环，β-折叠1朝向观看者，β-折叠2在其后面。B，DNA在β1-β2，β2-β3，和β4-β5环的缝隙间穿过，绑定在OB-fold的表面。Cdc 13-DBD含有大约200个氨基酸残基（从497/924到694/924）,位于这个蛋白质的中心部位[2][3]，与单链端粒DNA结合高度紧密(Kd=0.3nm)，在细胞外实验已证实其结合具有特异性[4][5]。在图2B中可以看出，ssDNA在Cdc 13-DBD上以一种不规则的构造延伸着,11个脱氧核糖核苷酸围绕着Cdc 13-DBD成140°，与蛋白质表面的两个构造不同接口相互作用。从5’到3’，ssDNA依次经过β1的N端，沿着β4、β5、β3弯曲，最后与不规则的β2-β3环延伸作用，β1-β2，β4-β5环形成一个缝隙夹紧DNA链。未发现DNA链与C端螺旋有何相互作用[1]。Cdc 13的端粒调节机制及其与细胞周期关系端粒长度的调节由一个三聚物CST（Cdc 13，Stn 1和Ten 1）实现[6]，图3。CST在端粒的保护和复制调节中起双重作用[7]。尽管Cdc 13是主要的DNA结合亚基，但三种蛋白在端粒保护中都起作用，且移除其中任何一个亚基都会导致C-strand的降解，G-strand悬垂结构的过度延长，触发RAD9细胞周期检验点，最终使细胞停留在G2细胞周期[8,9,10]。在S期末期，Cdc 13的磷酸化促进其与端粒酶亚基——Est 1的直接作用[11]，从而加强端粒酶对染色体末端的延伸[12,13]。随后Cdc 13去磷酸化，通过减少Est 1与Cdc 13结合，增加Stn 1与Cdc 13结合来限制端粒酶的活动[11,14]。Cdc 13和Est 1配合与DNA聚合酶α的两个亚基（Pol 1和Pol 2）直接作用，招募DNA聚合酶α补齐C-strand[15,16]，图4。图3，CST三聚物简单示意图。图4，端粒调节简单示意图。[18]Shang Li, Svetlana Makovets等在前人基础上提出一种Cdc 13磷酸化的精细模型[11]。图5细胞周期进入到S期末期时，Cdk 1（细胞周期蛋白依赖性激酶1）在T308磷酸化Cdc 13，被磷酸化的苏氨酸308在G-strand悬垂结构上使Cdc 13偏向于与Est 1结合（反之，去磷酸化则减少Cdc 13与Est 1的相互作用，促进Cdc 13与Stn 1/Ten 1结合），将逆转录酶催化亚基Est 2活化，募集模版TLC 1RNA与Est 3形成端粒酶全酶，推动端粒TG1-3DNA的延伸[17]。除了Cdk 1的磷酸化作用，短端粒对Tel 1优先募集，随后Tel 1/Mec 1将Cdc 13磷酸化（在丝氨酸249和丝氨酸255或其他尚未明确的磷酸化位点）与Cdk 1的磷酸化协同作用，促进Cdc 13对端粒酶复合物的募集。Cdc 13及其同功蛋白尽管Cdc 13与Pot 1缺乏序列上的相似性，但Cdc 13-DBD含有的OB-fold与Pot 1含有的OB-fold在结