高效液相色谱方法及应用精编.pptVIP

高效液相色谱方法及应用 色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支，是一个具有强大生命力的分离分析技术。 高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。 高效液相色谱法的特点 一、与经典液相色谱法比较 经典液相（柱）色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。 ? 高效液相色谱法使用了全多孔微粒固定相，装填在小口径、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。 二、与气相色谱法比较 气相色谱仅能测量在操作温度下可气化且不分解的物质，而对高沸点化合物、非挥发性物质、 热不稳定物、离子型化合物及高聚物的分离及测量有困难，致使其应用受到了很大的限制。 高效液相色谱法不受样品挥发度和热稳定性的限制，适合分离生物大分子、离子型化合物、不稳定的天然产物以及其他各种高分子化合物等。 据统计，在已知化合物中，能用气相色谱测量的约占20％；能用高效液相色谱测量的达到70％～80％。 三、高效液相色谱法的特点 1.分离效能高 2.选择性高 3.检测灵敏度高 4.分析速度快 高效液相色谱法的分类 按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 1.吸附色谱（Adsorption Chromatography） 2.分配色谱（Partition Chromatography） 3.离子色谱（Ion Chromatography） 4.体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography） 5.键合相色谱法（bonded-phase chromatography） 6.亲和色谱（Affinity Chromatography） 按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较 高效液相色谱仪简介 1.贮液瓶 2.高压输液泵 3.进样器 4.色谱柱 5.检测器 6.记录装置 贮液罐(流动相) 一、流动相脱气 （1）吹氦脱气法 （2）加热回流法 （3）抽真空脱气法 （4）超声波脱气法 （5）在线真空脱气法 高压输液泵及梯度洗脱装置 一、高压输液泵 高压输液泵可以分为以下两类： 1．恒流泵：可输出恒定体积流量的流动相。 （1）注射式泵（又称注射式螺杆泵） （2）往复型泵 2．恒压泵：恒压泵又称气动放大泵，是输出恒定压力的泵。 二、梯度洗脱装置 1．梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。 2．梯度洗脱特点：提高柱效以及改善检测器的灵敏度。 进样装置 液相色谱常用的进样方式有三种：直接注射进样、停流进样和高压六通阀进样。 直接注射进样的优点是操作简便，并可获得较高的柱效，但这种方法不能承受高压。 停流进样是在高压泵停止供液、体系压力下降的情况下，将样品直接加到柱头。这种进样方式操作不方便，重现性差，仅在不得已时才使用。 高压六通阀进样的优点是进样量的可变范围大、耐高压、易于自动化，但容易造成谱峰柱前扩宽。 色谱柱 多用内壁抛光的不锈钢制成，内径2～6mm，直形柱柱长l0～l00cm。 在需要增加柱长时，可使用死体积小的连接管，把几根直形柱串接起来。 检测器 用于液相色谱中的检测器，应具有灵敏度高、噪声低、线性范围宽、响应快、死体积小等特点，还应该对温度和流速的变化不敏感。 液相色谱法中有两种基本类型的检测器：