第十讲猪链球菌病诊断.pptVIP

* * 第八讲 猪链球菌病诊断 猪链球菌病： 是由致病性猪源链球菌感染引起的猪疫病的总称。猪链球菌病的临床表现主要是败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎以及关节炎。 OIE列为B类传染病 病原： 1 猪链球菌2型（Streptococcus suis 2） 2 马链球菌兽疫亚种（ Streptococcus equi subsp zooepidemicus )，旧称兽疫链球菌 3 D、E、L、S群链球菌 (Lancefield)兰氏血清学分群，链球菌分为 20个血清群（A、B、C.....V,I、J除外） 一、病原分离 1 采样 活猪：采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体 病死猪：扁桃体、肺、肝、血液，有脑炎症 状取脑组织，关节炎可取关节囊液 2 分离培养 （1）培养基：THB培养基、绵羊血或马血平板 （2）培养条件：需氧兼性厌氧、37℃、pH7.2 猪链球菌2性营养要求比马链球菌兽疫亚种低，后者需加3-5%的犊牛血清 二、临床诊断 主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。 但不同链球菌病原引起的症状类似，故该诊断不能用于确诊。 关节炎症状 败血症 1 染色镜检 猪链球菌2型： 革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。 二、微生物学诊断 马链球菌兽疫亚种： 革兰氏阳性球菌，直径0.5~1um，液体培养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。营养要求较高，在5%犊牛血清生长良好。根据类M蛋白抗原性的差异，该菌至少有15个血清型。 马链球菌兽疫亚种 猪链球菌2型菌（α 溶血） 图2 猪链球菌2型 (ZY05719) ? ATCC 35246株 2 培养特性 猪链球菌2型： 菌落形态 血平板上呈灰白色小菌落，粘稠，2型在绵 羊血平板上呈α溶血，马血平板则呈β溶血。 马链球菌兽疫亚种： 在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。 于5％绵羊血琼脂（THA）培养基上培养24 h，大部分菌株形成3～4mm的粘液样大菌落，产生明显的β溶血。小部分呈非粘液样菌落，大小约1mm左右。 3 生化鉴定 猪链球菌2型： 发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵 棉实糖、菊糖；不发酵甘露醇、山梨醇 马链球菌兽疫亚种： 能水解精氨酸，发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖和海藻糖。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。 三、免疫学诊断 1 玻板凝集实验 用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种只能用于定群 2 乳胶凝集实验 敏感性较高，结果容易判断，但有非特异性 3 免疫荧光 猪链球菌2型： 用MRP特异抗体可用于菌体表面其分布的观察，但需用激光共聚焦显微镜。 马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察 MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像 MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像 SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像 ELISA 常用链球菌多克隆抗体包被，以MRP或类M蛋白的单克隆抗体夹心，敏感性高，特异性较强。 四、分子诊断 1多酶电泳法： 原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。 用于不同型链球菌的分析 2 限制性酶切图谱分析 原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。 用于分离株变异分析，亦可用于不同种或型的鉴定 随机扩增多态DNA分析（RAPD） 用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。 可用于种或型的鉴定或分离株变异分析 *