7第七章植物快速繁殖和脱毒.ppt

茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。 微茎尖指带有1～2个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。 普通茎尖指较大的茎尖（如几mm到几十mm）、芽尖及侧芽。 这里主要讲普通茎尖培养。 茎尖培养是组织培养中用得最多的一个取材部位。 因为这种培养技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需时间短。 2、培养的步骤 2.1 取材 2.2 消毒 2.3 接种 2.4 培养基 2.5 培养条件 3、茎尖培养的应用 3.1形态建成研究 茎尖分生组织培养取材便利,培养条件能严格控制，十分有利于形态建成的研究。 3.2 无病株的生产 迄今为止, 人们发现的植物病毒已超过600种，无病毒苗的培养在农业生产中作用越来越大，取得了良好的经济效益和社会效益。 病毒的特性及其对植物的危害 大多数植物病毒不经种子传播； 无性繁殖的植物，都易受到一种或多种病毒的侵染。 1 病毒在植物体内的分布 病毒在植物体内的分布具有不均匀性，随植株不同部位和年龄而异。 老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高 根尖、茎尖生长点约0.1~1mm区域内，几乎不含病毒。 （原因？） （原因：分生组织细胞分裂和生长速度快，而病毒在植物体细胞内繁殖速度相对较慢；另外，病毒是通过筛管组织或胞间联丝传播至其他组织细胞的，而茎尖分生组织无分化，没有维管组织。） 病毒在植物体内的分布具有不均匀性的理论假说 (1) 能量竞争 病毒核酸和植物细胞分裂时DNA合成均需要消耗大量的能量，而分生组织细胞本身很活跃，其DNA合成是自我提供能量自我复制，而病毒核酸的合成要靠植物提供能量来自我复制，因而就得不到足够的能量，从而就抑制了病毒核酸的复制。 (2) 传导抑制 病毒在植物体内的传播主要是通过维管束实现的，但在分生组织中，维管组织还不健全，从而抑制了病毒向分生组织的传导。 (3) 激素抑制 在分生组织中，生长素和细胞分裂素水平均很高，因而阻滞了病毒的侵入或者抑制病毒的合成。 (4) 酶缺乏 1969年，Stace-Smith提出，可能病毒的合成需要的酶系统在分生组织中缺乏或还没建立，因而病毒无法在分生组织中复制。 (5) 抑制因子 1976年，Martin-Tanguy等提出了抑制因子假说，认为在分生组织中存在有某种抑制因子。 2.1 茎尖培养脱毒理论依据： ①植物细胞的全能性学说，任何细胞都含有全套的遗传信息，具有形成完整植株的能力； ②植物病毒在寄主体内分布不均匀，茎尖部位病毒含量极低或不含病毒。 2.6 影响茎尖培养法脱除植物病毒的因素 母体材料病毒侵染的程度 外植体的生理状态 起始培养的茎尖大小 培养基及培养条件 茎尖培养脱毒效果的好坏与茎尖大小呈负相关，切取的茎尖越小，脱毒效果越好； 而培养茎尖成活率的高低则与茎尖大小呈正相关，切取茎尖越小，成活率越低。 一般剥离带1-2个叶原基的茎尖即可获得较好的脱毒效果。 茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低。一般生长素/细胞分裂素的比值大于1时有利于根的形成，否则有利于芽的分化。 康乃馨不同大小茎尖与康乃馨斑驳病毒的脱毒效果 愈伤组织热处理法 从患病植株上取叶片（茎片、鳞片、花器等）进行离体培养，诱导形成愈伤组织，然后将愈伤组织反复继代培养同时兼用热处理。 常用的温度及处理时间 37℃ ~ 38℃（2、4或8周） 50℃（3~15min) 愈伤组织继代兼热处理钝化TMV和CMV获得烟草无病毒植株的效果 该方法的缺点： 存在20%~30%左右的变异率，无病毒苗苗期较长。柑橘要6~8年才能结果。 苹果茎陷病毒的茎尖培养脱毒 接穗： 0.2mm茎尖 砧木：无菌实生苗的胚轴（带两片子叶） 方法：劈接法将接穗插入两片子叶之间的组织中 微体嫁接法(micrografting) 脱除病毒的关键： ①要求剥离技术很高 ②需要考虑砧木和接穗对营养组成的不同要求； ③与接穗的取材季节有密切关系（苹果4~6月取材嫁接成活率较高。） 有的植物对污染物非常敏感。如牵牛花中含有花青素，该色素在碱性溶液中为蓝色，在酸性溶液中为红色，故从早晨至晚上，随着二氧化碳含量增加，牵牛花花色从蓝变红。牵牛花即是对空气中二氧化碳浓度的指示植物。雪松对二氧化硫和氟化氢很敏感，当空气中存在这两种气体时，其叶片就会出现枯黄现象。紫鸭跖草在低强度的辐射后，花色即由蓝色变成粉红，这种植物可以作为测量辐射强度的“指示剂”。 接种方法 ①摩擦接种法 接种时取待测植物的幼叶，加少量水及等量0.1mol/L磷酸缓冲液（pH值7.0），磨成匀浆，吸取少量浆液揩抹在指示植物叶片上涂有500～600目金刚砂部分，轻轻磨擦使浆液能侵入叶片表皮细胞但又不损伤叶片。5分钟后用水冲洗叶面。 血