生化提取实验讲.docVIP

生 化 制 药 技 术 威海职业学院 生物与化学工程系 二0一一年二月 目 录 前言……………………………………………………………………………………………1 项目一 L-胱氨酸的制备与鉴定……………………………………………………………2 项目二 溶菌酶的制备………………………………………………………………………4 项目三 卵磷脂的制备及鉴定………………………………………………………………6 项目四 甘露醇的制备及鉴定………………………………………………………………7 项目五 芦丁的提取与鉴定…………………………………………………………………9 参考文献 ……………………………………………………………………………………11 前 言 《生化制药技术》是生化制药技术专业的专业核心课程之一，生化制药技术实验实训指导书是本课程的重要组成部分。根据该课程教学大纲的规定，学生在掌握一定生化药品制备技术理论知识的基础上，必须通过实验实训学习，掌握生化药品制备常用的提取、分离、精制、干燥等方法和实验操作技术，培养学生科学认真的工作态度和熟练的基本操作技能。 本实验实训指导书的编写，主要参照《生化制药技术》、《现代生物制药工艺学》、《天然植物化学》等参考资料所收载的部分内容，结合本专业实训基地现有的实验实训条件，从中选出较为典型的生化药品实例的制备方法，供学生实验学习使用。 实验设计包括氨基酸、蛋白质、酶、脂及多糖类等，生化药品制备与鉴定基本操作技术，以培养学生进行生化药品的生产制造与鉴别的能力。 为了完成本课程实验实训教学大纲的学习内容，要求学生实验实训课前，必须认真预习，明确实验目的，熟悉实验内容和方法，并结合课堂教学，理解实验的基本原理；实验中必须有严谨的科学态度和实事求是的工作作风；严格操作，正确使用仪器，认真观察实验现象，详细、真实地做好实验原始记录；实验报告要求书写正确规范；严格遵守实验室规章制度，注意安全，保持室内卫生。 本实验实训指导书由李顺康、高英霞、殷永新、肖凤华、元超老师编写完成，主要供生化制药技术实验实训的学生参考。 由于编者按水平有限，加之时间仓促，如有不当之处，恳请读者批评指正。 ——编者 项目一 L-胱氨酸的制备及鉴定 一、实验目的要求 1、熟悉用人发制备氨基酸类药物的原理。 2、掌握水解法制备氨基酸的方法。 二、实验重点和难点 L-胱氨酸的制备与精制方法。 三、实验原理 蛋白质由一定数量的氨基酸经过特定的排列方式组合而成的。因此，在一定条件下将蛋白质水解可得到各种氨基酸的混合液，再经过进一步的提取、精制，即可得到所需的氨基酸。 本实验是用已洗净并干燥的人发，先用酸水解，然后调节pH至胱氨酸等当点（5.05左右）时，胱氨酸从水解液中沉淀出来，经精制得到其结晶。 四、实验仪器、试剂与材料 1、仪器：500ml短颈圆底烧瓶、冷凝管、电热套、玻璃漏斗、玻璃棒、抽滤瓶、布氏漏斗、恒温水浴锅、真空泵、表面皿、烧杯、滤纸。 2、试液：（1）10mol/L盐酸溶液：取盐酸90ml加水稀释至100ml，摇匀，即得。 （2）6%盐酸溶液：取盐酸6ml加水稀释至100ml，摇匀，即得。 （3）10%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠10g，加水溶解，放冷，加稀释至100ml，摇匀，即得。 （4）25%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠25g，加水溶解，放冷，加稀释至100ml，摇匀，即得。 （5）10%氨水溶液：取氨10ml加水稀释至100ml，摇匀，即得。 （6）2%硫酸铜溶液：取硫酸铜2g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。 （7）0.1%EDTA溶液：取乙二胺四乙酸二钠0.1g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。 （8）75%乙醇溶液：取无水乙醇75ml加水稀释至100ml，摇匀，即得。 （9）0.5%茚三酮-丙酮溶液：取茚三酮0.5g，加丙酮溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。 3、试剂与材料：胱氨酸对照品、粉末活性炭、苯酚、盐酸、氢氧化钠、氨、硫酸铜、乙二胺四乙酸二钠、无水乙醇、95%乙醇、茚三酮、丙酮、人发。 五、实验操作 1、人发的处理：取无染色的人发，用碱性或中性洗涤剂洗净，用清水洗至水呈中性，晾干并剪短备用。 2、回流装置安装：在回流冷凝管上端接一弯玻璃管，下连一小漏斗用水封住，漏斗刚好接触水面，但不能伸到水中以免倒吸，避免氯化氢气体自仪器中逸出到空气中。 3、水解：称取人发50g，置圆底烧瓶中，加10mol/L盐酸溶液100ml，加沸石或玻璃珠3粒，加热回流6～7小时，回流过程保持缓缓沸腾。 水解完全后应不呈双缩脲反应，可停止反应，否则应继续水