第9章发酵过程工艺控制1培养基和溶氧(免费阅读).pptVIP

第九章 发酵过程工艺控制 本章的重点和难点 重点：培养基、氧、温度、pH 、氧的需求、泡沫、补料对发酵的影响及其调控。 难点：影响发酵因素的调控 学习本章的目的 微生物发酵的生产水平除取决于生产菌种本身的性能外，还必须予以微生物合适的环境条件才能发挥和表现出它的优良生产能力。研究和了解与生产菌种相关的环境条件，如培养基组成、温度、pH 、氧的需求、泡沫、发酵过程中补料等，可以为掌握菌种在发酵过程中的代谢变化规律，进行合理的生产工艺控制提供理论基础。 一、碳源的种类和浓度对发酵过程的影响及控制 （一）碳源的种类对发酵的影响及控制 碳源的种类对发酵的影响主要取决于其性质，即快速利用的碳源还是缓慢利用的碳源。快速利用的碳源（ 如葡萄糖 ）能较快地参与微生物的代谢、合成菌体、产生能量，并产生分解产物（ 如丙酮酸等 ），对菌体生长有利，但有的分解代谢产物对产物的合成会产生阻遏作用；缓慢利用的碳源多数为聚合物（ 如淀粉 ），不能被微生物直接吸收利用，需要微生物分泌胞外酶将聚合物分解成小分子物质，因此被菌体利用缓慢，有利于延长代谢产物的合成时间，特别是延长抗生素的分泌期。许多微生物药物的发酵就是采用这种方法以获得较高的产量，如乳糖、蔗糖、麦芽糖及半乳糖分别是青霉素、头孢菌素 C 、核黄素及生物碱发酵的最适碳源。因此，选择合适的碳源对提高代谢产物的产量非常重要。 例：在对青霉素发酵的早期研究中，人们就认识到了碳源的重要性。在快速利用的碳源葡萄糖培养基中，菌体生长良好，但合成的青霉素却很少；而在缓慢利用的碳源乳糖培养基中，菌体生长缓慢，青霉素的产量却有明显的提高。它们的代谢变化如图 。 （二）碳源的浓度对发酵的影响及控制 碳源的浓度对于菌体生长和产物的合成有着明显的影响，如培养基中碳源含量超 5% ，细菌的生长会因细胞脱水而开始下降。酵母或霉菌可耐受更高的葡萄糖浓度，达 200 g/L ，这是由于它们对水的依赖性较低。并且，在某一浓度下碳源会阻遏一个或更多的负责产物合成的酶，这称之为碳分解代谢物阻遏。碳源浓度的优化控制，通常采用经验法和发酵动力学法，即在发酵过程中采用中间补料的方法进行控制。在实际生产中，要根据不同的代谢类型来确定补糖时间、补糖量、补糖方式等。而发酵动力学法要根据菌体的比生长速率、糖比消耗速率及产物的比生产速率等动力学参数来控制。 例1：碳源浓度对产物形成的影响以酵母的 Crabtree 效应为典型例子，即酵母生长在高糖浓度下，即使溶氧充足，它还会进行厌氧发酵，从葡萄糖产生乙醇，如图 。 当葡萄糖浓度大于 0.15 g/L 时便产生乙醇。为了阻止乙醇的生成，需控制生长速率和葡萄糖浓度。在这种情况下采用补料分批或连续培养可以避免 Crabtree 效应的出现。 例2：在利用重组毕赤酵母高密度发酵生产水蜂素的研究中发现，甲醇一方面作为碳源构成细胞骨架，使细胞生长；另一方面又作为能源物质用于菌体生长、维持外源蛋白的表达。提高碳源浓度可有效地增加产物表达的量，但甲醇浓度的提高会抑制细胞生长甚至导致细胞死亡。因此，利用甲醇传感器控制甲醇的流加量，同时以限制性速度混合流加甘油，可获得较高的水蛭素产量。 二、氮源的种类和浓度对发酵的影响及控制 （一）氮源的种类对发酵的影响及控制 1．氮源的种类 根据氮的来源可分为无机氮和有机氮。发酵工业中常用的无机氮包括硝酸盐、铵盐、氨水等；有机氮包括豆饼粉、花生饼粉＋玉米浆、蛋白胨、酵母粉、酒糟、尿素等。和碳源一样，也可以把氮源分为可快速利用氮源和缓慢利用氮源。前者包括氨基（或铵）态氮的氨基酸（或硫酸铵等）和玉米浆等；后者包括黄豆饼粉、花生饼粉、棉籽饼粉等蛋白质。 2．不同种类氮源对发酵的影响及控制 可快速利用氮源容易被菌体所利用，有利于菌体生长，但对某些代谢产物的合成，特别是对某些抗生素的合成产生调节作用而影响产量。例如，链霉菌的竹桃霉素发酵中，采用促进菌体生长的铵盐浓度，能刺激菌丝生长，但抗生素的产量反而减少。铵盐对柱晶白霉素、螺旋霉素同样产生类似的调节作用。缓慢利用氮源对延长次级代谢产物的分泌期、提高产物的产量是有好处的。但一次性的投入也容易促进菌体生长和养分过早耗尽，导致菌体过早衰老而自溶，从而缩短产物的分泌期。考虑到上述原因，发酵培养基一般选用含有快速和缓慢利用的混合氮源。例如：氨基酸发酵用铵盐（硫酸铵或醋酸铵）和麸皮水解液、玉米浆作为氮源；链霉素发酵采用硫酸铵和黄豆饼粉作为氮源；红霉素发酵采用硫酸铵和黄豆饼粉作为碳源，其中借助吸附缓释原理，将无机氮储存在一个库中缓慢释放，即培养基中无机氮源浓度高时将其纳入库中，菌丝生长需要时又可自动流加进来，以此来调节氮的利用。 氮源种类对发酵过程的影响除体现在其是快速利用氮源或缓慢利用氮源外，还有一