胸腹水脱落细胞流式细胞法DNA 倍体分析的临床诊断价值.docVIP

胸腹水脱落细胞流式细胞法DNA 倍体分析的临床诊断价值 李　乐, 伍严安, 黄源茂 摘要: 　目的　探讨胸腹水脱落细胞流式细胞法DNA 倍体分析对诊断良恶性胸腹水的临床价值。　 方法　应用流式细胞仪( FCM) 对84 例患者(恶性肿瘤组35 例,非恶性肿瘤组49 例) 的胸腹水脱落细胞进行DNA 倍体分析;以检出异倍体为恶性肿瘤判断标准,并与胸腹水常规脱落细胞学涂片检查结果比较。 结果　(1) 恶性肿瘤组:25 例检出异倍体,阳性检出率为71. 4 %;常规细胞学法20 例检出癌细胞,阳性检出率为57. 1 %; FCM 法与细胞学检查法联合检测28 例阳性,检出率为80 %。(2) 在恶性肿瘤组的25 例异倍体中,17 例病理检查检出癌细胞,8 例未检出;而在20 例常规细胞学检出癌细胞的患者中,3 例DNA 倍体分析无异常。(3) 非恶性肿瘤组8 例DNA 表现为异倍体峰,但病理检查示间皮细胞活跃增殖,或未检出癌细胞。　结论　FCM 法的灵敏度较脱落细胞法高,但2 种方法的检测结果存在一定的差异;FCM2DNA 倍体分析在良恶性胸腹水的鉴别诊断上尤其当临床高度可疑而病理无法定性时,可作为诊断的重要参考与补充。 关键词: 　胸腔积液,恶性; DNA ; 倍体; 胸部肿瘤; 流式细胞术 中图分类号: 　R734. 02 　　　文献标识码: 　A 　　　文章编号: 　167224194 (2007) 0220159204 收稿日期: 2006204204 　　　修回日期: 2006212219 作者单位: 福建医科大学省立临床学院、福建省立医院检验科,福州　350001 作者简介: 李　乐(1967～) ,女,副主任技师 　　胸腹水是胸腹腔脏器病变常见的临床表现,其产生机制十分复杂,准确快速地判定其良恶性对疾病的诊断、治疗有重要意义;有的疾病有时仅以胸、腹水为首发唯一症状,给临床鉴别诊断带来许多困难。传统的判断方法主要依靠胸腹水的常规脱落细胞学检查和生化指标检测,这些方法易受主客观因素影响,检出率较低。流式细胞术( FCM) 具有对流动状态下的细胞进行快速大量、多参数分析的特点,在肿瘤研究方面的应用越来越广。笔者应用FCM 对84 例患者的胸腹水脱落细胞进行DNA 倍体分析,并与胸腹水常规脱落细胞学涂片检查结果比较,探讨DNA 倍体分析对良恶性胸腹水的鉴别诊断价值。 1 　临床资料 1. 1 　一般资料　84 例中,男性50 例,女性34 例,年龄(53 ,2 ±15. 7) 岁(21～99 岁) ,均经临床诊断和病理细胞学检查确诊,并经X 线检查、CT、MRI 证实。84 例患者分为2 组: (1) 恶性肿瘤组( n = 35) :肺癌19 例,胃癌5 例,肝癌4 例,胰腺癌2 例,卵巢癌2 例,胆囊癌、附睾腺癌、胸腺癌各1 例。(2) 非恶性肿瘤组( n = 49) :结核性胸膜炎17 例,肝硬化15例,肺梗死6 例,脓胸4 例,慢性胃炎3 例,心功能衰竭2 例,外伤2 例。 1. 2 　方法　(1) 将新鲜胸水或腹水1 000 r/ min 离心10 min ,收集脱落细胞,用p H 7. 4 、浓度0. 01mol/ L 的PBS 洗涤2 次,将悬液的细胞数调整为106 mL21 ,备用。取上述悬液100 μL 在DNA2Pre样品自动制备仪(美国Beckman2Counter 公司) 上完成破膜、PI 染色和固定等步骤,放置30 min 后,用300 目的滤网过滤除去细胞团块和凝固块,备用。 (2 ) DNA 倍体分析: FCM ( EPICS XL 型, 美国Beckman2Counter 公司) 检测染色处理后的悬液,每例测定10 000 个细胞,数据分析采用MCYCL E 细胞周期分析软件,并以健康人外周血淋巴细胞作为正常二倍体标准对照。 (3) 常规脱落细胞学涂片检查:结果判断以病理科细胞学检查报告为准。 (4)DNA 异倍体的判断。根据文献[ 123 ]制定FCM 诊断瘤细胞的标准如下: ①在正常二倍体G0 / G1 峰以外出现另一G0 / G1 峰作为标准,并且其DNA 指数(DI = 样品细胞G0 / G1 峰道值/ 标准细胞G0 / G1 峰道值) 1. 10 或 0. 90 ,且有相应的G2M 峰出现。②若直方图中仅出现单一G0 / G1 峰,则要求细胞周期中G2M 期的细胞数 2. 5 %细胞总数; G0 / G1 峰的CV 比值超过正常的CV 比值的平均值两倍的标准差。③G0 / G1 峰明显不对称。④若直方图中二倍体细胞干系的增殖细胞数 10 %细胞总数,即S 期10 % ,则定义为异倍体出现。 2 　结　果 2. 1 　DNA 倍体分析　FCM 分析健康人外周血淋巴细胞获得的正常细胞周期,