第七章光学检测技术.pptVIP

第七章 光学检测技术 利用物质所具有的各种光学性质，对物质进行定性、定量及结构分析的技术。 包括：旋光检测、析光检测、荧光检测、分光光度检测、散射光谱检测等。 生化领域常用：分光光度检测、旋光检测、荧光检测 一 分光光度检测 又称分子吸收光谱检测，是利用物质分子所特有的吸收光谱而对物质进行定性定量测定的检测技术。 紫外分光光度检测（200～400nm） 可见光分光光度检测（400～760nm） 红外光分光光度检测（760～10000nm） 1 样品溶液的配备 （1）对各种光有选择性吸收特性的物质 （2）本身没有颜色的物质，转变为有色的物质溶液 2 样品的检测 选择好入射光的波长，空白液调零，测定。 3 待测物质的定性分析 （1）将样品溶液在一定条件下（pH、温度、缓冲液等）测得的吸收光谱与物质的标准吸收光谱相对照，推断样品是什么。 （2）根据样品吸收光谱中峰顶与峰谷吸光度之比值，与相当条件下资料所载的比值比较，推断样品是什么。 如 ATP: OD280/OD260=0.85, OD250/ OD260=0.90 AMP: OD250/OD260=0.85, OD280/OD260=0.22 (3)将分光光度检测与层析或电泳分离技术相配合，综合判断。 4 待测物质的定量分析 （1）标准曲线法 注意：对于存在有干扰物质的样品要进行校正。 （2）Lambert-Beer