分子生物学(基因组概述)方案.ppt

Cui mie 2) 部分酶解+完全酶解 1200bp 1000bp 800bp 完全酶解 部分酶解 1200bp 1000bp 800bp 3000bp 1800bp 2200bp 1200bp 1000bp 800bp R R 部分酶解 1200bp 3000bp 2200bp 3)末端标记+部分酶解 * 3) 末端标记+部分酶解 4.1 限制性作图 B. 限制性作图的规模受限于限制性片段的大小 如果使用的限制酶在DNA上切点相对较少，构建限制性图谱就比较容易。 限制性作图更适用于小分子。如果DNA分子小于50 kb，通常选用6碱基识别序列的限制性酶来构建限制图谱。 对于大于50 kb的DNA分子，可以选用“稀有酶”进行构建。 稀有酶: 4.1 限制性作图 B. 限制性作图的规模受限于限制性片段的大小 选用识别序列为7或8碱基的限制性内切酶进行切割。如：Sap I (7)；Sgf I (8)。 选用识别序列所含基序在靶DNA分子中稀少的酶。如人类基因组中，5’-CG-3’序列就比较稀少，如果选用Not I（5’-GCGGCCGC-3’）进行消化，平均约10 Mb才有一个切点。 可用该技术构建原核生物和低等真核生物（酵母和真菌）等染色体较小的生物的限制图谱。限制性作图不能用于大型基因组。 4.1 限制性作图 B. 限制性作图的规模受限于限制性片段的大小 如果用普通琼脂糖凝胶