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mRNA差异显示方法研究进展 哺乳动物细胞约有100?000个不同的基因，在一定时间、空间中仅有10％～15％的基因表达，这种表达受到严格调控［1］。运用mRNA差异显示方法［2］，可将不同细胞类型或同一细胞在不同环境下表达的基因进行比较，从分子生物学水平上提供信息，这对理解细胞的生命过程极有帮助。该技术一经问世，立即得到广泛应用，但同时也遇到许多问题，所以Debouck［3］曾对该方法提出质疑。现将DD的研究进展简要综述如下。 　　一、DD方法基本原理 　　DD的基本原理是将具有可比性的细胞在某一条件下可表达的mRNA群体通过逆转录方法变成相应的cDNA群体，以此为模板，利用一对特殊引物，即3引物和5引物，在一定条件下进行PCR扩增，得到与mRNA相对应的“标签”，然后用变性聚丙烯酰胺测序胶分析其差别，将有差别的基因克隆化，进一步分析其结构与功能。DD依赖三种技术：mRNA逆转录技术；以特定引物进行的PCR技术；DNA测序胶电泳技术。 　　二、DD方法的优点及其应用 　　用某一方法来寻找mRNA表达的差异，至少要满足下列要求：在一定时间、空间里，每一个细胞约有15000种mRNA表达，其中除少数属高丰度表达外，大量的属于低丰