不锈钢表面钽沉积生物相容性的研究.docVIP

不锈钢表面钽沉积生物相容性的研究 　　【摘要】 目的：验证医用不锈钢316表面钽沉积后生物相容性的变化。方法：在医用不锈钢316表面进行钽沉积，之后将大鼠骨髓基质干细胞分别植入钽沉积表面和316基底表面，分别进行X射线衍射检测材料表面钽沉积量、两种材料表面细胞形态观测、细胞黏附率检测、碱性磷酸酶活性检测。结果：经X射线衍射检测钽有效的沉积于医用不锈钢316表面；细胞于两种材料表面生长良好；24 h细胞黏附率钽沉积表面高于316不锈钢表面（P0.05）；经过5 d连续细胞培养，钽沉积材料表面大鼠骨髓基质干细胞的活性高于316不锈钢材料表面（P0.05）。结论：316医用不锈钢经过钽沉积后其表面生物相容性高于其本来材料。 　　【关键词】 细胞； 生物材料； 生物相容性； 气相沉积 　　医用金属材料，由于其优良的物理化学性能和生物相容性而被广泛的应用于医学临床领域，尤以口腔和骨科为甚[1-3]。临床上常用的医用金属材料为316钴钼合金、钛合金、纯钛等。其中，由于316合金的价格低廉且易于加工而被广泛的应用。但近年来的研究发现，与其他大部分医用金属一样，316合金的生物相容性并非完美[4-5]。其应用于临床时会有部分组织排斥的现象出现。现在对于生物相容性的研究，学者们发现金属钽具有几乎近于完美的生物相容性，且将其应用于临床后发现其临床效果极佳[6-7]。受限于钽高昂的价格，钽的临床应用增加了患者的负担。在本研究中，拟以316金属为基底，通过化学气相沉积技术使金属钽在316金属表面沉积，并对沉积钽后的材料进行生物相容性评价，对其临床应用前景进行评估。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料制备 将直径为1 cm、厚度为2 mm的圆形316不锈钢片表面抛光，超声波清洗，干燥后备用，将五氯化钽置于陶瓷坩埚内，同处理后的316不锈钢片分别置入化学气相沉积机的反应管内，载气为氩气，还原气为氢气，反应温度为800 ℃，沉积时间为2 h。将沉积后的材料取出后备用。 　　1.2 X射线衍射检测 将经过钽沉积的金属片放于扫描镜的载物台上，经表面喷金后进行X射线质谱分析，已确定沉积层的物理成分。 　　1.3 骨髓基质干细胞分离培养 将1只4周龄SD大鼠脱颈处死后，无菌取出双侧股骨，PBS冲洗，去除表面的多余组织，在无菌条件下，去除股骨两端，用含20%FBS的DMEM培养基冲洗骨髓腔，将冲洗液收集，置于25 cm2培养瓶中，首次24 h换液，3～4 d传代，扩增细胞后备用。 　　1.4 细胞黏附实验 将两种金属片清洗干燥后备用，将培养瓶中的骨髓基质干细胞消化、吹打、离心、重悬，调整细胞密度为1×104个/mL。 　　取次细胞悬浮液200 ?m分别植入两种金属表面，依靠表面张力使液体不外流，置于细胞培养箱中连续培养24 h后，PBS冲洗，将金属片表面的细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后，吹打下来，进行细胞计数，分别计算两组材料表面细胞24 h黏附率，并进行统计学分析。 　　1.5 材料表面细胞形态学观察和碱性磷酸酶活性检测 将细胞分别接种于两种材料表面，在培养的第3天，分别取出两种材料，对材料表面的细胞进行用PBS清洗，多聚甲醛固定，酒精梯度脱水干燥，在金相显微镜下观察材料表面细胞生长状况，并照相记录。在培养的第5天将两种材料取出，PBS清洗，Trion100裂解细胞，将裂解液收集进行碱性磷酸酶检测（南京建成生物技术研究所碱性磷酸酶检测试剂盒）。 　　1.6 统计学处理 采用SPSS 12.0统计学软件分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用配对t检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 X射线衍射检测 经X射线衍射检测316表面沉积物为钽。 　　2.2 材料表面基质干细胞形态学观察 在两种材料表面生长的基质干细胞为圆形、多角形或梭形，胞浆比例大，胞质透明，胞核圆形，生长状态良好，见图1。 　　2.3 细胞黏附实验 经过24 h细胞黏附检测，钽沉积材料表面的细胞黏附率为（93.34±1.72）%，316不锈钢表面为（85.63±1.53）%，差异有统计学意义（P0.05）。 　　2.4 材料表面细胞碱性磷酸酶活性检测 经过5 d材料表面细胞培养后，经碱性磷酸酶检测，钽沉积材料表面的大鼠骨髓基质干细胞的碱性磷酸酶活性为（115.32±3.27），316不锈钢表面为（81.23±3.35），差异有统计学意义（P0.05）。 　　3 讨论 　　医用金属材料由于具有良好的物理学性质且价格低廉，被广泛的应用于医用材料领域，用来进行硬组织缺损的修复、骨折的固位、关节的替代等[8-9]。但由于机体免疫系统的存在，对于金属材料的植入难免会发生或多或少的免疫排斥反应，使材料在机体内发生腐蚀或被吸收，使手术植入失败