猪圆环病毒2型的分离鉴定及其对BALBc小鼠的致病性试题.docVIP

分类号 学 号 U D C 密 级 学 位 论 文 猪圆环病毒2型的分离鉴定及其对BALB/c小鼠的致病性研究 罗 琦 指导教师姓名：高 崧 教授，扬州大学，江苏扬州，225009 申请学位级别： 硕 士 学科专业名称： 兽医硕士 论文提交日期： 2015年6月 论文答辩日期： 2015年6月 学位授予单位：扬 州 大 学 学位授予日期： 2015年6月 答辩委员会主席： 论 文 评 阅 人： 2015年6月 猪圆环病毒2型的分离鉴定及其对BALB/c小鼠的致病性研究 Isolation and identification of porcine circovirus type 2 and their pathogenicity in BALB/c mice 研究生：罗琦 专 业：兽医硕士 导 师：高 崧 教授 扬 州 大 学 兽 医 学 院 201年6月 江苏部分地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及其对BALB/c小鼠的致病性研究 摘 要 猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2, PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrom，PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、猪繁殖障碍、猪先天性振颤等疾病的主要病原之一。病毒感染诱导宿主免疫抑制，免疫力大大降低，引起多种病原微生物的继发或并发感染，给养猪业造成难以估量的损失。 为了检测本地区的PCV2的流行情况，本研究采集了江苏部分地区病死猪样品及规模化屠宰场样品并使用PCR的方法检测猪圆环病毒Ⅰ型（PCV1）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）、伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪蓝耳病毒（PRRSV）六种常见病原。利用Dulac细胞对PCV2检测为阳性的样品进行病毒分离纯化，对分离到的PCV2毒株测序并做遗传进化分析。 PCV2的病机理一直是研究的热点，但是PCV2单独感染并明显的临床症状，而研究PCV2的感染动物模型常为价格昂贵、饲养困难的SPF猪。为选择理想的实验动物对PCV2致病性进行进一步研究，本研究选取了BABL/c小鼠作为实验动物，通过荧光定量PCR、间接免疫荧光等方法监测PCV2在小鼠体内的分布，并通病理切片研究PCV2对小鼠组织的损伤，为PCV2的BABL/c小鼠动物模型提供一定。 第一章 猪圆环病毒2型的分离鉴定及几种常见病原的流行病学调查 通过PCR的方法对扬州大学动物医院采集的江苏部分地区的234份病死猪病料与规模化屠宰场采集的205份肺门淋巴结进行检测，结果显示：从动物医院采集的234份病死猪样品中检测到123份病料为PCV2阳性，阳性率为52.6%；27份病料为PCV1阳性，阳性率为11.5%；34份病料为PRV阳性，阳性率为14.5%；25份病料为PPV阳性，阳性率为10.7%；12份病料为PRRSV阳性，阳性率为6.0%；12份病料为CSFV阳性，阳性率为5.1%。从规模化屠宰场采集的205份肺门淋巴结中，分别检测到119份PCV阳性，35份PCV1阳性，5份PPV阳性，2份PRV阳性，阳性率分别为58.1%，15.1%，2.4%和0.97%，未检测到CSFV和PRRSV。混合感染统计中PCV1和PCV2的混合感染最为严重，共有45份，占总数的10.2%；PCV2和PRV混合感染共有13份，占总数的2.9%；PCV2和PPV的混合感染共有12份，占总数的2.7%；PPV/PRV，PCV1/PCV2/PPV，PCV1/PCV2/PRV的混合感染均为3份，占总数的0.7%。本文从PCV2检测阳性的样品中分离到9株PCV2毒株，对这9株PCV2进行测序并绘制遗传进化树。结果表明，分离到的9株PCV2全长均为1767 bp，其中6株属于PCV2b 1C亚型，3株属于PCV2b 1B亚型。分离到的9株PCV2同源性为96.0%~99.9%。 第二章 猪圆环病毒2型对BABL/c小鼠的致病性研究 为研究PCV2对BABL/c小鼠的致病性，从本文分离到的PCV2毒株中选取了140316