糖原的显示.docVIP

糖原的显示—PAS反应 实验目的 掌握显示细胞中多糖成分的PAS反应的原理和方法； 了解多糖成分在细胞中的分布和相对含量。 实验原理 糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（—CHO），游离醛基与Schiff ‘s试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比。 单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，能显示的糖类主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等因此要确定此红色物质是否糖原还需要同时进行对照实验。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色，若反应为阴性，则表明是糖原，反之则为其他多糖。 实验用品 器材：盖玻片、载玻片、染色缸等 试剂：1%过碘酸溶液；Schiff‘s试剂，亚硫酸，Carnoy试剂，甲醇，苏木精等 材料：鲫鱼（鲫鱼血细胞） 实验步骤 1、取鲫鱼血制作血涂片，室温晾干 2、Carnoy（3甲醇:1冰乙酸）固定（15分钟） 3、蒸馏水温和洗涤一次（1分钟） 4、0.5% 过碘酸溶液侵泡10-15分钟 5、蒸馏水洗涤1分钟 6、亚硫酸洗涤1分钟 7、Schiff试剂浸泡15分钟 8、取出亚硫酸水溶液冲洗3次，每次1分钟 9、蒸馏水洗涤一次（1-2分钟） 10、光学显微镜下镜检 注：对照片的设置 为了确保实验结果的可信性，在实验中