专题3课题1菊花的组织培养讲述.ppt

一、植物组织培养 （一）概念：在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞或原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。 （二）原理：植物细胞的全能性。 （三）应用：1.快速繁殖 2.种苗脱毒 3.远缘杂交 4.突变育种 5.基因工程 6.生物制品 （四）植物组织培养的基本过程 （五）影响植物组织培养的因素 1.外植体的选取 （1）不同植物组织培养难度不同； （2）同种植物的不同组织培养难度不同。 通常选取生长旺盛、分裂快、全能性高的部位，如芽、茎尖、根尖、形成层等。 菊花—未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 2.培养基的配置（MS培养基） 大量元素：N、S、 P、Ca、Mg、K 微量元素：Fe、Mn、B 、Zn、Mo 、Cu 、I 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素 3.植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量比例 二、实验操作 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 1.配制各种母液： 大量元素浓缩10倍； 微量元素浓缩100倍； 激素、微生物、用量小的有机物1mg/mL。 无菌箱、 18—22℃ ，每日光照12h * * --无性繁殖 离体的植物器官、组织、细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 根 芽 植物体 （外植体） 愈伤组织 细胞排列疏松而无规则， 高度液泡化， 呈无定形状态， 薄壁细胞 各种营养物质分别有什么作用？与微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 使用顺序 实验结果 先生长素，后用细胞分裂素 细胞分裂，但不分化 先细胞分裂素，后用生长素 细胞既分裂又分化 同时使用 分化频率提高 如何控制植物的脱分化和再分化？ 生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素 在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。 4.pH、温度、光照 菊花 pH5.8 温度18—22℃ 每日光照12h （注：形成愈伤组织过程中不需要光照） 5、消毒、灭菌 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境。 植物组织培养用的培养基，含有植物生长发育所需要的各种营养物质，这些营养物质同样为细菌等微生物提供了适合的营养。在这种培养基上，细菌等微生物比植物细胞具有更强的新陈代谢能力，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。 制备MS固体培养基 外植体消毒 接 种 培 养 栽 培 移 栽 MS固体培养基成分及比例 水 琼脂 热溶 （一）制备MS固体培养基 2.配制培养基 蔗糖 母液 定容 调pH 分装 灭菌 注：菊花茎段的组织培养不必添加植物激素。 流水冲洗 70％的酒精浸泡不超过6-7s 无菌水震荡冲洗3次 0.1％的氯化汞溶液浸泡1-2min 无菌水震荡冲洗5次 （二）外植体消毒 （三）接种 （四）培养 （五）移栽 （六）栽培 无菌操作：工作台消毒，酒精灯火焰等 注意方向：形态学下端插入培养基