毒功b理学.docVIP

综 合 性 实 验 报 告 学院：食品科学技术学院 班级：食品科学与工程 学号 姓名：杨长锋 酒精对小鼠肝脏谷丙转氨酶(GPT)的影响 摘要：该试验通过对小白鼠灌喂50%的酒精，量的梯度为0.01ml、0.013ml、0.04ml和0.08ml，通过实验探究该酒精浓度下小鼠肝脏中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的变化而得到酒精对小白鼠的影响，进一步推断人们生活中饮酒对自身健康的影响。 关键词：酒精 小鼠肝脏 谷丙转氨酶 1.引言 饮酒对肝脏的影响众所周知，饮酒可以引起肝脏损害，是酒精性肝病中最早出现，最为常见的病变。酒精肝是由于长期大量饮酒（嗜酒）所致的肝脏损伤性疾病。轻度酒精性脂肪肝多无症状，中、重度酒精性脂肪肝可呈现类似慢性肝炎的表现，如轻度全身不适、倦怠、易疲劳、恶心呕吐、食欲不振、腹胀等。在治疗肝病药物的选择上，尽量选择一些毒副作用小的天然植物保肝药物来护肝，因为有些治疗肝脏疾病的药物毒副作用较大，造成了对肝脏的2次伤害。 国内外均有资料表明，长期、大量饮酒可以造成肝功能异常、乙醇性肝病、肝硬化、肝癌等研究发现日摄乙醇20 g即可增加天冬氨酸氨基转移酶(AST)异常危险性和引起谷氨酰转肽酶(GGT)异常；40 g对肝脏损害严重，可以引起乙醇性肝病，研究显示饮酒可引起GGT、ALT(丙氨酸氨基转移酶)和AST异常，并与饮酒量成正比，其中尤以GGT异常为著、AST次之。几年来我国酒精肝的发病率与日俱增，这主要与我国酒文化和餐桌文化有关，通过本次试验为酒精对肝脏影响提供一定的理论依据。 2.材料与方法 2.1仪器和药品 2.1.1仪器 分光光度计、注射器(1m1)、灌胃针头、试管、鼠笼。 2.1.2药品 (1)磷酸盐缓冲液（0.1mol/L，pH7.4)：取甲液420ml和乙液80ml，混合均匀即得。 ①甲液(0.1mol/L 磷酸二氢钠）：取NaH2PO4·12H2O 35.82g，加蒸馏水溶解后稀释至1000ml。 ②乙液（0.1mol/L磷酸二氢钾）：取无水KH2PO4 13.61g，加蒸馏水溶解后稀释至l000ml。 (2)丙酮酸钠标准液（2mmol/L）：在100ml磷酸盐缓冲液中溶解22.0mg丙酮酸钠。 (3)0.4mol/L氢氧化钠溶液：先配1mol/L NaOH{(称取NaOH 40g，用蒸馏水溶解后稀释至1000ml即得)，以1mol/L NaOH 稀释配成0.4mol/L NaOH。 (4)SGPT基质液：精确称取DL-丙氨酸1.79g和α-酮戊二酸29.2mg，放于100ml烧杯内，加入少量(约15m1)磷酸盐缓冲液及少量1mol/L的NaOH溶液使其溶解，并调pH至7.4，放入100ml容量瓶内，用磷酸盐缓冲液定容，4℃冰箱保存，此液每升含α-酮戊二酸2mmol、丙氨酸200mmol。 (5)2,4-二硝基苯肼液(1mmol/L)：称取19.8mg 2,4-二硝基苯肼，加1mol/L盐酸至100ml使之成为溶液。盛于棕色瓶内备用。 (6)50％酒精的溶液（实验时用50°食用白酒） 2.2动物及分组 2.2.1动物 健康、未妊娠的小鼠，雌雄不拘，共五只（每只近25g）。 2.2.2分组 实验分为两个组，阳性（正常）对照组一只（灌胃同量水），肝损按其剂量不同分为四个梯度，每个梯度一只 2.2.3给药方式及剂量 给药用灌胃的方式进行，实验组分别灌50°食用白酒，根据医学资料表明，正常成年人每天能代谢的酒精量不能超过150克，依据一般人的酒精急性毒性量为8g/kg计算得每只小鼠最高（1/5*8g/kg*25）可灌胃乙醇0.04g（0.04ml）计算成50°食用白酒为0.08ml。所以设置灌胃梯度分别为(1/20)0.01ml、(1/15)0.013ml、(1/10)0.04ml、(1/5)0.08ml分别标号1、2、3、4号 2.3样品制备 取健康、未妊娠的小鼠4只小鼠分别灌以50％酒精溶液0.01ml、0.013ml、0.04ml和0.08ml以损害其肝脏实验。 取损伤肝24h后的鼠全血(断头取血)入干净离心管中，静离心后取其血清。同法制取健康小鼠的血清（对照），均置待用。 2.4检测方法 2.4.1标准曲线的绘制 SGPT作标准曲线时，按表1操作。 表1 GPT标准曲线制作步骤 单位：ml 试剂 空白 1 2 3 4 5 0.1mol/L磷酸盐缓冲液 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.