HPV、TCT与阴道镜在宫颈癌检查中的应用研究.docVIP

HPV、TCT与阴道镜在宫颈癌检查中的应用研究 　　[摘要] 宫颈癌是影响女性健康的重要疾病。在对女性宫颈癌的检测中，HR-HPV对各种病症的敏感度较高，但是特异性较低。与之相反，对宫颈癌用TCT检测则具有较高的特异性，但是敏感度较低。而将这两个检测方式与阴道镜一起进行联合检测，则可以大大提高筛选宫颈癌及癌前病变的正确率，并获得及早期诊断的检出率，本文即以此研究分析。 　　[关键词] 宫颈癌；HPV；TCT 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.03.011 文章编号：1004-7484（2014）-03-1214-02 　　[摘要] 宫颈癌是影响女性健康的重要疾病。在对女性宫颈癌的检测中，HR-HPV对各种病症的敏感度较高，但是特异性较低。与之相反，对宫颈癌用TCT检测则具有较高的特异性，但是敏感度较低。而将这两个检测方式与阴道镜一起进行联合检测，则可以大大提高筛选宫颈癌及癌前病变的正确率，并获得及早期诊断的检出率，本文即以此研究分析。 　　[关键词] 宫颈癌；HPV；TCT 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.03.011 文章编号：1004-7484（2014）-03-1214-02 　　细胞项目：见鳞状细胞、见宫颈内膜细胞、未见化生细胞。 　　微生物项目：未见念珠菌、未见滴虫、未见放线菌。 　　病毒项目：未见疱疹病毒感染、未见乳头瘤病毒感染。 　　总体分类：正常细胞涂片中度炎症。 　　样本质量满意度：满意。 　　炎症细胞的覆盖比例：50%-70%。 　　2.1.2 裂解与杂交 用HPV裂解液对生物样品中的HPV进行裂解，分离提取核酸；用SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4特异性引物从上述步骤所得核酸中扩增HPVL1核酸片段；对获得的HPVL1核酸片段进行焦磷酸测序反应，焦磷酸测序引物选自SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.3任意一种或几种；将焦磷酸测序读出的序列与HPV型别序列进行比对，判断HPV分型结果。本发明利用DNA条码技术和焦磷酸测序技术，对生物样本中的HPV进行检测、分型，可用于评估生殖道癌症及相关疾病的发生发展并对其进行预后指导。 　　2.1.3 捕获 ①标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心（3000g，10min）洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA。②标本核酸的捕获：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液（10mmol/LTris-HCl，pH7.4，10mmol/LEDTA，150mmol/LNaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K）37℃下处理过夜，且等体积酚/氯仿（1：1），氯仿/异戊醇（24：1）各抽提2次；加1/10体积3mol/LNaAc（pH5.2）及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀DNA；加1体积乙醇洗涤1次；用60μl含RNA酶（100μg/ml）的TE液（10mmol/LTris-HCl，pH8.0，1.0mmol/LEDTA）溶解DNA，37℃温育30min。 　　2.2 TCT液基细胞学检测 引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区（E）和晚期区（L），每区含一系列开放读码框架（ORF）。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09，该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV。 　　2.3 阴道镜病理活检 临床上，宫颈癌是女性常见的一种恶性肿瘤，由于危害甚大，因而及早检查是非常有必要的，对于这一宫颈癌的检查项目，阴道镜可用于发现子宫颈部与癌有关的异型上皮、异型血管以及早期癌变的所在，以便准确地选择可疑部位作活组织检查。此外，阴道镜检查作为一种非损伤性及又可重复性的检查宫颈癌变的方法，可用于已婚或未婚而有性生活史的病人，它能迅速识别肉眼看不见的宫颈管病变，及时发现宫颈炎性病变及宫颈癌前病变或宫颈癌变，能直视下选择性地定位取活检，改变以往靠主观取活检的习惯，大大的提高活检的阳性率，据临床资料显示，对于这一宫颈癌的检查项目而言，阴道镜检查宫颈癌变阳性检出率100.00%。这对于宫颈癌的早期诊断是非常有帮助的。另外，必须值得一提的是，存在宫颈糜烂而有诱发宫颈癌的可能的患者，完全有必要做阴道镜检查，因为阴道镜检查也能够及早发现宫颈癌早期隐患。 　　3 讨 论 　　3.1 HPV与宫颈疾病 过去一直沿用的5级程度分类已经过时了，目前，最新的医