地中海贫血的诊断技术及其进展.doc

地中海贫血的诊断技术及其发展 【摘要】 地中海贫血是一种常隐性遗传病，为世界常见的遗传病之一。世界上约有4.83%的人口携带珠蛋白变异基因[1]，因而地中海贫血的诊断与预防就显得尤为重要。常用的诊断方法有生化筛查和基因诊断等，这两种方法都已取得不错的进展，在地贫筛查和产前诊断上取得了很大的成效。 【关键词】 地中海贫血；诊断；发展 地中海贫血是由于编码珠蛋白的α或β类珠蛋白基因发生缺失或点突变，使α或β类珠蛋白链缺如或不足所致的贫血。临床表现为溶血性贫血，根据受累珠蛋白基因不同，地中海贫血可分为α、β、δβ、δ等类型，临床常见为α-地中海贫血和β-地中海贫血两种。对于这两种贫血的诊断，在几代人的努力下，在准确性、可行性和普及性等方面已经取得了很大的进展。 1、地中海贫血的生化筛查 1.1 红细胞参数 用于地中海贫血筛查的红细胞参数包括RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC、RDW和红细胞形态等。红细胞参数 的检测分析也是诊断地中海贫血最基本的试验。地中海贫血最重要的血液学指标是血红蛋白含量、红细胞计数和红细胞比容。若平均红细胞体积MCV＜80fl、平均红细胞血红蛋白含量MCH＜27pg，提示其可能是地贫杂合子[2]。但需要注意的是儿童MCV随年龄而呈现动态变化[3]。RBC也可以作为地中海贫血筛查的指标，对于杂合子地贫，常表现为MCV、MCH减低同时有RBC的增加，RBC常大于5.0×1012/L。RDW和外周血涂片红细胞形态观察也可以作为辅助指标。这一检测方法简便、迅速，也较为普及。但不足之处就是不能有效地把缺铁性贫血区别开来，对于α-地中海贫血和β-地中海贫血的诊断也没有特异性。故此法还需除外其他可能引起此性状的病或是结合其它诊断方法。 1.2 红细胞渗透脆性试验 地中海贫血患者的红细胞膜存在形态、生化、代谢异常，因而在低渗溶液中，当水渗透其内部达一定程度时，红细胞发生膨胀破裂，地中海贫血患者的渗透脆性降低[4]。该试验是地中海贫血群体筛查最简便的方法。 1.3 血红蛋白组分分析 血红蛋白组分分析是地贫诊断不可缺少的检查项目[5]，由于此病是血红蛋白病，故相对于以上几种方法要可靠。电泳是临床上最常用的血红蛋白分析技术，主要有醋酸纤维素薄膜电泳、毛细管电泳和琼脂糖凝胶电泳等。由于各种Hb在pH8.5的缓冲液中均带负电荷且等电点不同，电泳速度不同，故而在电泳图谱上呈现不同区带位置，通过比较各区带染色的强度来计算HbA、HbA2、HbF的含量从而对Hb进行筛查。此外高效液相色谱法（HPLC）也可以用于血红蛋白的检测。由于其具有可用全血标本、标本量少、标本无需处理、操作简单、敏感性高等优点，在HbA2和HbF的测定上具有一定得优势。HPLC也可与CE技术合用进行血红蛋白分析，通过二者的互补作用，为地贫的诊断提取更有价值的数据，以便进行结果分析。此外还可进行HbF定量检测、HbA2检测、不稳定血红蛋白检测、抗碱血红蛋白检测、肽链分析、直接免疫细胞化学法检测红细胞血红蛋白含量等。MCV、红细胞渗透脆性试验及Hb电泳3项平行联合检测的灵敏度及特异度分别达100.0%、79.7%，平行联合检测的灵敏度及各单位检测灵敏度之间差异有统计学意义，是地中海贫血诊断及其产前筛查中最理想的试验方法[6]。 2、地中海贫血的基因诊断 2.1 α-地中海贫血的基因诊断 α-地中海贫血多由基因缺失所引起。（1）gap-PCR ：对于常见的已知缺失型突变，可使用gap-PCR进行快速诊断。通过设计两对引物，其中一对引物位于缺失区域的两侧，扩增缺失基因，观察两对引物有无扩增条带的组合，来区分正常、纯合子和杂合子。gap-PCR快速、简单、无放射性，可以检测缺失和重排，是目前诊断缺失型地贫的常规方法。（2）Southern杂交技术：对于断点序列尚未明确的缺失型α-地中海贫血，需采用ξ和α基因探针，用Southern杂交技术检测。Southern杂交方法主要用于较大片段缺失造成的缺失型地中海贫血，在很长一段时间曾是α-地中海贫血基因诊断和产前诊断的最主要方法[7]。(3)反向点杂交法（RDB）：对于点突变型α-地中海贫血可以采用此方法。RDB主要特点是多种等位基因特异性寡核苷酸同时参与检测样品DNA又不互相干扰，在一次实验同时可辨别多种点突变，且RDB的靶序列可通过PCR扩增获得足够的拷贝数，以便于同位素检测。RDB的准确性目前认为仅次于DNA测序的方法，目前RDB法仍是欧洲一些分子诊断实验室分析点突变的首选技术之一[8]。 2.2 β-地中海贫血的基因诊断 （1）限制性片段长度多态性连锁分析：β-地中海贫血多为点突变，目前已在β基因簇中发现17个多态性限制酶切点，经过对受检者及父母的1个或几个多态性酶切位点进行家系连锁分析，可以进