微生物的分离与培养.docVIP

微生物的分离与培养 实验原理： 一、 培养基的制备 培养基通过人工加入微生物的生长所必需的各种成分，包括水，碳源，单元，无机盐和生长因子各种营养物质配置而成的养料。 二、 微生物的接种 微生物接种技术是生物科学研究中最基本的操作技术。由于实验目的，培养基种类及容器等不同，所以接种方法不同。用不同的接种方法以获得生长良好的纯种微生物。 三、 微生物的培养 不同的微生物对营养需求不同，根据这点可以通过培养基对微生物的做初步分离。 质粒的提取 碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA和质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的的。在PH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断链，双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的大部分氢键也断链，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以PH4.8D的NaAc高盐缓冲液冲击去调节其PH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质—SDS的复合物等一起沉淀下来而被除去。 PCR技术 DNA的半保留复制时生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋或单链。在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制或同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高