生物技术制药期末解答.docVIP

1.基因工程药物生产的过程： ① 基本过程：获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌（或细胞）→培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装 ② 主要步骤：目的基因的克隆，构建DNA重组体，构建工程菌，目的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化，产品的检验。 ③ 基因工程药物的生产必须首先获得目的基因，然后用限制酶和连接酶将所需目的基因插入适当的载体质粒或噬菌体中并转入大肠杆菌或其他宿主菌，以便大量复制目的基因。目的基因获得后，最重要的是使目的基因正确表达。将目的基因与表达载体重组，转入合适的表达系统，获得稳定高效表达的基因工程菌。 2.基因工程菌的不稳定性 基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。 基因工程菌的质粒不稳定常见的是分裂不稳定。质粒的分裂不稳定是指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒的子代菌的现象。它主要与两个因素相关：一是含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率，质粒丢失率与宿主菌、质粒特性和培养条件有关；二是这两种菌比生长速率差异的大小。 质粒的结构不稳定是DNA从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。质粒自发缺失与质粒中短的正向重复序列之间的同源重组有关，具有两个串联启动子的质粒更容易发生缺失；在无同源性的两个位点之间也会发生缺失；培养条件也会对质粒结构不稳定性产生影响。 3.实现高密度发