实验——DNA分子的限制性内切酶消化、片段纯化、连接课件.pptVIP

DNA分子的限制性内切酶消化、片段纯化、连接 实验原理 限制性内切酶（restriction endonuclease）是一类能识别双链DNA分子中特定碱基序列的核酸水解酶，简称限制酶或内切酶。 EcoR I 酶识别： 5′N-G↓A-A-T-T-C-N- -N-C-T-T-A-A↑G-N-5′ Bam H I 酶识别： 5′N-G↓G-A-T-C-C-N- -N-C-C-T-A-G↑G-N-5′ 实验原理 限制性核酸内切酶的命名：以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株（品系）。 EcoR：来自Escherichia coli RY13 BamH：来自Bacillus amylolique faciens H（淀粉液化芽孢杆菌） 在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶，可以编成不同的号。 实验原理 两种不同的限制性核酸内切酶同时切割同一底物时，要采用两种酶都适合的缓冲液。 本实验所用的10 ?K缓冲液，成分如下： 200 mM Tris-HCl，pH8.5 100 mM MgCl2 10 mM DTT（二硫苏糖醇） 1000 mM KCl 实验原理 操作步骤 双酶切反应： 在离心管内，按顺序加入下列成分（单位：?L）：