实验七 蔗糖酶的制备和活力测定课件.pptVIP

实验 七 蔗糖酶和制备和比活力的测定 酵母蔗糖酶的制备 各级分蔗糖酶溶液活性的测定 （包括葡萄糖标准曲线的制备） 3. 各级分蔗糖酶溶液蛋白质含量的测定 4. 各级分蔗糖酶溶液比活力的计算 蔗糖酶制备的原理 酵母中的蔗糖酶以两种形式存在于酵母细胞膜的外侧和内侧，在细胞膜外细胞壁中的,称之为外蔗糖酶，其活力占蔗糖酶活力的大部分，是含有50% 糖成分的糖蛋白。在细胞膜内侧细胞质中的称之为内蔗糖酶，含有少量的糖。两种酶的蛋白质部分均为双亚基，二聚体，两种形式的酶的氨基酸组成不同，外酶每个亚基比内酶多两个氨基酸，Ser和Met，它们的分子量也不同，外酶约为27kDa(或22 kDa，与酵母的来源有关)，内酶约为13.5kDa。 两种酶底物专一性和动力学性质仍十分相似，因此，本实验未区分内酶与外酶，而且由于内酶含量很少，极难提取，本实验采用研磨水抽提，提取纯化的主要是外酶。 蔗糖酶制备的方法 实验方法参看实验指导教材（p76）。 注意级分II同书上有所不同。在第二步进行热处理（50℃，30分钟）后，离心后将上清转移到离心管中，此时取离心管中的上清约1.5ml，放在小离心管中，作为级分II。 乙醇沉淀后的固体蔗糖酶，等量分装在两个1.5ml的离心管中，4℃下保存，做为下两次实验中的酶。 蔗糖酶活性测定原理 蔗糖酶特异性催化非还原糖中的α-呋喃果糖苷键水解,具有相对专一性,能催化蔗