第二章基因工程操作的工具酶(10.3.15)课件.ppt

第二章 基因工程操作的工具酶 2.1 基因工程工具酶 1.工具酶的概念 2.限制性内切酶 3.DNA聚合酶 4 DNA连接酶 5.碱性磷酸酶 6 末端转移酶 7 核酸酶S1 8 T4多核苷酸激酶 1.工具酶的概念 应用与基因工程的各种酶的总称. 切: 连: 修饰: 2.限制性内切酶 主要从细菌中分离得到，核酸水解酶。酶识别特定的核苷酸顺序，但在细菌本身的DNA中，这些顺序已被甲基化修饰，因而不被水解；这些酶仅限于水解外源DNA以保护自身，故称之为“限制性”酶。 以内切方式水解DNA，产物的5’为p， 3’ 为OH。 限制性内切酶的发现 Luria和Human发现： λ．K噬菌体 ---------------Ecoli λ．B噬菌体---------------- Ecoli 广泛存在于原核细菌 。 由宿主控制的对外源DNA的限制(restriction)和对内源DNA的修饰(modification)现象称为宿主细胞的限制和修饰作用。 作用： 一：保护自身DNA不受限制； 二：破坏入侵的外源DNA，使之降解。 Smith和Wilcox从流感嗜血杆菌中分离到一种酶，能够特异性的切割DNA，这个酶被命名为Hind I,这是第一个分离到的限制性内切核酸酶。 限制性内切酶的定义 指限制修饰系统中的一个组成部分，具有识别双链DNA分子中的某种特定核酸序列，并由此切割DNA双链结构