仪器分析教学课件作者魏培海电子教案第八章高效液相色法课件.ppt

第八章 高效液相色谱法 第一节 高效液相色谱仪 第二节 液相色谱中的固定相和流动相 一、液相色谱固定相 第三节 液相色谱法的主要类型 一、 液-固吸附色谱 二、 液-液分配色谱 三、 离子交换色谱 四、 离子色谱 五、 离子对色谱 六、 排阻色谱 色谱柱的两端有烧结不锈钢或多孔聚四氟乙烯过滤片，以防止柱内的填料流出。 填充好固定相后的柱子有方向性，在使用时，应使流动相的方向与柱子管外箭头标的方向一致。 四、检测器 可以 无 无 ~10-8 通用性 质谱 不可 有 有 10-9 选择性 电导 困难 有 有 10-10~10-9 选择性 极谱 可以 无 低 ~10-7 选择性 红外吸收(IR) 可以 无 低 10-12~10-9 选择性 荧光(FD) 不可 无 有 5?10-7 通用性 示差折光(RI) 可以 无 低 5?10-10 选择性 紫外光度(UV) 用于梯度洗脱 流速影响 温度影响 最高灵敏度（g/mL） 类型 检测器 1．紫外检测器 应用最广： 适于约有70％的样品。 灵敏度高： 线性范围大： 死体积小：（1mm × 10mm ，8 μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感。 分类：固定波长型、可调波长型和二极管阵列检测器。 特点： 固定波长： 254 nm或280nm 固定波长紫外检测器 可调波长紫外检测器 二极管阵列检测器 2．荧光检测器 工作原理：利用某些试样具有荧光特性进行检测。 特点：高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； 3．示差折光检测器 工作原理：折光指数与组成有关，连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比； 特点：通用型检测器； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱。 分类：偏转式、反射式和干涉型三种。 偏转式：它是基于折射率随介质中的成分变化而变化，如入射角不变，则光束的偏转角是流动相(介质)中成分变化的函数。因此，测量折射角偏转值的大小，便可得到试样的浓度。 一、液相色谱固定相 二、液相色谱流动相 1．按固相材料的刚性程度分类 刚性固体 硅胶：用于液固色谱的固定相，液相色谱的担体，化学键合固定相基质材料。 硬质凝胶 聚苯乙烯与二乙烯基苯交联而成的多孔颗粒：只应用在离子交换色谱和凝胶色谱中。 2．按固相填料的疏松程度分类 薄壳型微珠载体（表面多孔型） 构成：30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶、多孔氧化铝或分子筛等，形成壳形结构。 特点：①多孔层厚度小、孔浅、柱效高； ②分配过程在载体表面进行，出峰快； ③颗粒大，装柱容易，适于常规分析 。 全多孔型载体 构成：硅胶、氟化铝或硅藻土的微粒凝聚而成多孔球体。 特点：颗粒较细，整个微粒全部是多孔性物质，表面积大，负荷量大。适合于复杂混合物分离和痕量分析。 3．化学健合固定相 通过化学键的方式把有机分子结合到载体表面，形成一种新型固定相。它可以避免因机械涂布固定液，导致在色谱分离中使固定液流失的缺陷。 化学键合相的载体主要是硅胶（表面有硅醇基）： 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 反相键合色谱中，键合相碳链越长，分离效果越好。 化学键合固定相的特点 （1）传质快：表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长：化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； （3）耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好：可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱。 二、液相色谱流动相 （1）称为淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 1.液相色谱流动相的特性 ①合适的溶解力与极性。 ②化学稳定性要好，与固定相和被测组分不发生化学反应。 ③与检测器相匹配。 ④溶剂的纯度要高。一般使用色谱纯试剂。 ⑤溶剂的流动性要好，黏度要低。 2.流动相应满足以下要求 3. 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯