第十三章 血栓与止血检验课件.ppt

（28.2～124.4）ng/L 注意事项 1．实验前10天必须停用阿司匹林类药物。 2．为避免激活血小板引起假性升高，不能选用其他抗凝剂。 3．采血顺利，尽快分离血浆。 4．当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。 5．一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 6．洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 TXB2 参考区间 第十三章 第六节 血栓形成 TXB2 临床意义 本实验受血小板影响因素较大，因此采血后应立即试验，并避免一些激活或影响血小板活性的药物及物品。 1．TXB2增高 见于血栓性疾病和血栓前状态，如动脉粥样硬化、心肌梗死、肺梗死、糖尿病、高脂血症、妊高症、DVT、恶性肿瘤、大手术后等。 2．TXB2 减低 见于先天性血小板花生四烯酸代谢障碍性疾病或服用阿司匹林、磺吡酮、咪唑及其衍生物等药物后。 第十三章 第六节 血栓形成 凝血酶原片断1+2检测 ， F1+2 原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，住包被单抗的微孔中依次加入凝血酶原片断1+2（prothrombin fragment 1+2, F1+2）抗原、生物素化的抗人F1+2抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的F1+2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品含量。 第十三章 第六节 血栓形成 F1+2 操作 1．加样 分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100 μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻摇混匀，加盖或覆膜，37℃反应120min。 2．弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素化的抗人F1+2抗体工作液100μl（以1μl生物素化的抗人F1+2抗体原液加99μl检测稀释液的比例配制，轻轻混匀，使用前1小时内配制），37℃，60分钟。 3．温育60min后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2min，350μl/孔，甩干。 4．每孔加HRP标记的亲和素工作液100μl（以1μl HRP标记的亲和素原液加99μl检测稀释液的比例配制，轻轻混匀，使用前1h内配制），37℃，60min。 第十三章 第六节 血栓形成 F1+2 操作 5．温育60min后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2min，350μl/孔，甩干。 6．依序每孔加底物TMB溶液90μl，37℃避光显色（30min内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止。 7．依序每孔加终止溶液90μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8．用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15min以内进行检测。 第十三章 第六节 血栓形成 （0.29～1.05）nmol/L 注意事项 1．洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 2．一次加样时间最好控制在5min内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 3．受检血浆必须以3000rpm/min以上离心分离。 4．每次测定时同时做空白对照和标准曲线，最好做复孔。 5．如标本中待测物质含量过高，须先稀释后再测定，计算时最后乘以稀释倍数。 F1+2 参考区间 第十三章 第六节 血栓形成 血浆F1+2反映了凝血酶原酶的活性，是凝血酶生成的标志，含量增高代表FXa增高和凝血活性亢进，临床上用此试验判断凝血第二阶段的状况。 1．增高 见于血栓前状态和血栓性疾病，DIC、深静脉血栓形成、肺栓塞、急性白血病、先天性和获得性抗凝血酶缺乏症、蛋白C缺乏症、蛋白S缺乏症等，口服避孕药及雌激素替代治疗时也可升高。 2．减低 见于口服抗凝剂患者，可作为口服抗凝剂的监测指标。 F1+2 临床意义 第十三章 第六节 血栓形成 血浆凝血酶-抗凝血酶复合物检测 ,TAT 原理 应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（thrombin-antithrombin, TAT）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入TAT抗原、生物素化的抗人TAT抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TAT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 第十三章 第六节 血栓形成 TA