质粒DNA提取及纯化.罗云鹏例析.ppt

提出问题及备注小结 1.用碱裂解方法制备质粒DNA过程中温度需要注意什么？ 2.为什么要严格控制碱变性时间？ 温度低于30摄氏度效果很好，如果室温高于30摄氏度，会增加切口环状DNA的量。在这种情况下，转染的效率会有所降低，但对限制酶切DNA，DNA探针制备和DNA重组没有什么影响。 长时间碱处理会使超螺旋DNA发生不可逆变性，由此产生的环状卷曲型DNA不能被限制酶切割，所以要严格控制碱变性时间。 3.从核酸溶液中去除蛋白质的标准方法是先用酚抽提，然后再用氯仿抽提 这一流程的原因是？ 使用两种不同的有机溶剂去除蛋白质，比单一一种有机溶剂效果好。 4.酚使用前必须进行平衡使其PH值 在7.8以上，如果酚未被平衡会怎样？ DNA将趋于被分配到有机相。 2016 课题小组 DNA的提取和纯化 小量制备 大量制备 碱裂解小量制备法 氯化铯/溴化乙锭平衡力新法 碱裂解法制备粗制裂解物 煮沸小量制备法 名词解释 1.质粒 质粒zhìlì（Plasmid）是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子（即细胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的质粒虽然都是环状构型，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。然而，1984年，在Streptomyces coelicoler（天蓝色链霉菌）等放线菌以及在Borrelia hermsii（赫氏