新型肠道病毒89型结构蛋白VP1的构建表达及序列分析.docVIP

新型肠道病毒89型结构蛋白VP1的构建表达及序列分析 　　[摘要] 目的 研究克隆表达新型肠道病毒89型VP1结构蛋白，并进行活性鉴定和序列分析。 方法 分离肠道病毒89型VP1结构蛋白全基因，克隆入原核表达载体PET-28构建重组质粒pH-VP1，在大肠埃希菌BL21中进行表达，检测表达产物的特异性及活性。将EV89 VP1核酸序列与Genbank数据库中的序列进行比对并建立系统进化树。 结果 重组质粒在1 mmol/L的IPTG 37℃诱导7 h后可诱导表达得到约33 kD的蛋白，经Western Blot实验检测证明表达的融合蛋白具有EV89抗原的活性。分离的EV89病毒其VP1区核酸序列与Genbank数据库中仅有的3株EV89序列同源性分别为86.4%、85.9%、85.6%。 结论 成功构建EV89重组蛋白，其表达产物具有良好的特异性及活性，可进一步用于VP1检测方法的研制。进化分析表明，分离的EV89 VP1区与Genbank数据库中其他分离株亲源性较远。 　　[关键词] 肠道病毒89型；VP1蛋白；原核表达 　　[中图分类号] R373.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）12（a）-0004-04 　　肠道病毒自1969年首次被发现以来，在全世界引起了规模不等的爆发流行。自此，人们开始不断意识到肠道病毒所带来的严重公