第五章 色谱法ⅳ课件.pptVIP

高效毛细管电泳仪器（1） 高效毛细管电泳仪器（2） 高效毛细管电泳仪器（3） §5-12 毛细管电泳基本原理 分离类型 (3) 毛细管胶束电动色谱（MECC） §5-13 仪器装置 §5-14 影响柱效的因素及改进方法 §5-15 主要特点和应用 高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。 高灵敏度：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质。 高分析速度：可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟分离19种阳离子；4分钟可分离10种蛋白质。 试样用量少：仅需几 nL（10-9 L）的试样。 仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液。 不足之处： 进样不够方便。应用范围相对较窄。 分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。 第五章 色谱法 * 商丘师范学院精品课程建设 第五章 色谱法Chromatography 人类基因组计划 (Human genome project, HGP) 1990-2003 中南大学生物传感所毛细管电泳仪 20世纪30－40年代 蒂塞利乌斯 (A.W.K. Tiselius) (1902－1971)建立了移动界面电泳，将电泳发展成分离技术 获得1948年诺贝尔化学奖 §5-11 毛细管电泳概述 毛细管电泳，Capillary Electrophoresis (CE)，又称高效毛细管电泳(HPCE)。 1981年 J.W. Jorgenson, K.D. Lukacs实验上和理论上为毛细管电泳的发展奠定了基础。 它是一种新型分离分析技术，乃经典电泳技术和现代微柱分离有机结合的产物，是继高效液相色谱(HPLC)之后分析科学领域的又一次革命。 CE与经典电泳 两项重要改进： 一是采用了50—100 μm内径的毛细管； 二是采用了高达数万伏的电压。 CE与HPLC 不易清洗，产生死吸附，更换费用高 色谱柱 毛细管易清洗，更换费用低 分离重现性较好，定量精密度RSD1% 分离重现性较差，定量精密度RSD3~5% 种类多，紫外检测灵敏度高 检测器 种类少，紫外检测灵敏度低 易 组分收集 难 消耗大量有机溶剂，费用高，污染大 溶剂消耗少，费用低，污染小 每种柱子只适合一定分子量范围 大小分子可同时分析 较大 进样体积 小(纳升级) 较长 分析时间 较短 中等 柱效 高(105 ～107理论塔板) HPLC CE CE的特点 1.仪器简单、易自动化 电源、毛细管、检测器、溶液瓶 2.分析速度快、分离效率高 3min内分离36种无机及有机阴离子，4min内分离了24种阳离子；分离柱效：105～107/m理论塔板数； 3.操作方便、消耗少 进样量极少，水介质中进行； 4.应用范围极广 有机物、无机物、中性分子、生物大分子等； 分子生物学、医学、药学、化学、环境保护、材料等； ?美国药典? 、?中国药典?等药典均已收录毛细管电泳法。 数据来源：Web of science, 2009.11 检索主题词：Capillary Electrophoresis 数据来源：国家自然科学基金委, 2009.11 检索主题词：毛细管电泳 CE泛指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和/或分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。 CE分离的基础 带电粒子在电场下的迁移速度（电泳速度）为： νe = μe E E: 电场强度，是指单位距离的电压降（V/cm） μe：电泳淌度，是指单位电场下带电粒子的迁移速度。 电泳淌度不同是电泳分离的基础。 CE分离的基础 如果检测器在阴极端，能否检测负离子？ 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF）。 电渗流EOF EOF动画 毛细管中的电解质由于同时受到电泳和电渗流两种驱动力，在毛细管中的迁移速度等于电泳速度和电渗流速度的矢量和。 迁移速度 V0 = VEOF ± Ve 例题： 判断如下化合物的流出顺序？ A：Na+ B: Cl- C: 苯 D：SO42- A C B D CE：电荷均匀分布，整体移动，电渗流为平流，塞式流动（谱带展宽很小）； HPLC：溶液流动为层流，抛物线流型（引起谱带展宽较大）。 电渗流的流形 电渗流的方向取决于毛细管内表面