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苯系物的高效液相色谱分析 色谱技术 色普技术是指借在两相间分配原理 而使混合物中各组分分离的技术。 其中一相是不动的称之为固定相； 另一相是携带混合物流过此固定相的流体称为流动相 分离原理 在色谱分析过程中，当流动相携带者混合组分流经色谱柱的固定相时就会与固定相发生作用，由于各组分在结构和性质上的差异与固定相发生作用的大小、强弱也有差异，于是在同一推动力作用下，各组分在固定相中的滞留时间不同，当经过适当长度的色谱柱以后，各组分就会按先后不同的次序流出色谱柱，从而获得分离。 样品组分分离示意图 色谱图 检测信号和时间的关系图 不同的色谱峰对应相应的组分 可以得到相应组分的保留时间和峰面积信息。 保留时间– 定性分析 峰面积 – 定量分析 液相色谱法 以液体为流动相的色谱分析方法 高效液相色谱法 二十世纪六十年代中期发展起来，在经典液相色谱基础上，引入气相色谱塔板理论，技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效能高和操作自动化，故称之为高效液相色谱。 不受样品挥发性和稳定性的限制而适于分离： 生物大分子 离子型化合物 不稳定的天然产物 各种高分子化合物 反相色谱法 流动相极性大于固定相极性的分离体系 固定相：C18、 C8等 流动相：水或缓冲溶液与有机溶剂（甲醇、乙腈）的混合液 分离机理：被分离物质与固定相疏水作用力的差别 特点：操作系统简单、色谱分离过程稳定、分离技术灵活多变 高效液相色谱仪 （VARIAN Prostar) 保留值定性 归一化法定量 使用条件：样品中所有组分都要流出色谱柱，并给出信号。 特点：简便、准确、对进样量的要求不苛刻 不足：对某些不需要测定的组分也必须测出其信号及校正因子 实验内容 1 保留值定性 2 归一化法定量 实验条件 固定相： C18 4.6×100mm 流动相：甲醇 ：水＝ 87 ：13 进样量：10μl 流量：1.0ml/min 检测器波长：254nm 实验注意事项 1 开机，待柱压稳定后进样分析 2 分析下一个样品之前用待测液洗针 3 分析结束后激活Wash A方法冲洗色谱柱60min 4 Stop Pump待柱压降为零后依次关机 实验要求 1 严格按照仪器操作规程操作 2 认真做好原始实验数据记录 3 实验后进行卫生清扫 * 特 点 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测记录系统 储液灌 高压输液泵 梯度淋洗装置 六通阀 进样器 色谱柱 紫外检测器（UV） 计算机 色谱保留值（保留时间或保留体积）是色谱定性的依据 保留时间：组分从进样到出现峰最大值所需的时间 *
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