血必净注射液对急性百草枯中毒大鼠肺、血浆TNF—α和IL—10的影响.docVIP

血必净注射液对急性百草枯中毒大鼠肺、血浆TNF—α和IL—10的影响 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2013.11.006 　　基金项目：陕西省科学技术研究发展计划项目（2008K14-08） 　　作者单位：710038 西安，第四军医大学唐都医院急诊科 　　通信作者：王伯良，Email：wliang@fmmu.edu.cn 　　百草枯（paraquat，PQ）是目前使用广泛的除草剂，对人畜具有较强毒性，可以引起肝、肾、肺等主要脏器损害，其中，肺组织纤维化损害最为严重，并呈现进行性发展过程[1]，是导致重度患者死亡的首要原因。百草枯对人体损害极大，文献报道急性中毒病死率高达75%～80%[2]，但目前仍缺乏特效解毒剂以及有效治疗手段。临床研究发现应用血必净注射液对PQ中毒肺纤维化患者进行干预治疗，取得了良好的效果，可以明显减轻患者肺纤维化程度及发生率[3]，但其具体作用机制有待进一步阐明。笔者之前研究发现TNF-α和IL-10水平变化与百草枯中毒对肺脏损伤程度关系密切[4]。基于此，本研究拟从细胞因子角度进一步深入研究百草枯中毒后肺纤维化预防和治疗的具体机制，笔者通过采用给大鼠灌胃染毒百草枯制作急性中毒大鼠模型，观察大鼠中毒不同时间段持续给予腹腔注入血必净治疗后，大鼠血清与肺脏中炎性细胞因子TNF-α和IL-10水平动态变化情况，同时从病理学方面观察血必净治疗对中毒大鼠肺纤维化形成过程的影响，了解血必净注射液治疗对百草枯中毒后炎性细胞因子的影响及与肺纤维化形成之间的相关性，以便为研究百草枯中毒后肺纤维化形成机制及治疗措施的选择提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物分组与模型制造 　　健康雄性SD大鼠60只，体质量250～300 g，购自第四军医大学实验动物中心，实验动物随机（随机数字法）分为PQ组和血必净治疗组，每组30只。20%百草枯溶液（湖北沙隆达股份有限公司，批号201003310033）。用生理盐水稀释配成1 mg/mL PQ混匀溶液200 mL。PQ组大鼠经胃管灌胃染毒注入PQ液（15 mg/kg），制作PQ中毒模型。参考文献[5]，血必净注射液（天津红日药业股份有限公司，批准文号：国药准字Z200403）治疗组在PQ中毒组基础上，给予腹腔注入血必净2.5 g/kg，1次/d。各组按注药后6、12、24、72、120 h再分成5个亚组，每组6只。同时PQ中毒组给予等量无菌生理盐水腹腔注射对比观察。 　　1.2 材料 　　TNF-α和IL-10放射免疫试剂盒由北京科美东雅生物技术研究所提供。 　　1.3 血浆中TNF-α和IL-10的检测 　　实验动物模型制备成功后，分别在注药后6、12、24、72、120 h不同时间点，用10%水合氯醛以3 mL/kg体质量腹腔麻醉后，从腹主动脉取血6 mL，分别注入含乙二胺四乙酸（EDTA）、抑肽酶、含肝素试管中及空白试管中混匀，静置30 min后，4 ℃ 3000 r/min离心10 min，分离血浆及血清，-70 ℃保存。采用放射免疫分析技术进行检测，操作方法严格按照说明书进行。 　　1.4 肺脏组织中TNF-α和IL-10的检测造模 　　分别在注药后6、12、24、72、120 h不同时间点，取右肺下叶300 mg清洗清除组织中的血液成分，称重，在匀浆器中进行匀浆。4 ℃，3000 r/min离心15 min，取上清液，-70 ℃保存。采用放射免疫分析技术进行检测，操作方法严格按照说明书进行。 　　1.5 病理检查 　　在各观察时间点分别取右肺下叶行常规病理检查进行对比分析。 　　1.6 统计学方法 　　采用SPSS统计学软件进行数据处理，计量资料采用均数±标准差（ x±s ）表示，两组间比较采用成组 t 检验。以P0.05为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 血浆TNF-α和IL-10水平的变化 　　实验结果显示，治疗组较PQ组血浆TNF-α水平在6、12、24、72、120 h显著降低；血浆IL-10水平在12、24、72、120 h明显低于PQ组，且在72 h和120 h时间段降低幅度更为显著。见表1。 　　2.2 肺脏组织中TNF-α和IL-10水平的变化 　　实验结果显示，血必净治疗组较PQ组肺脏组织中TNF-α水平在6、12、24、72、120 h显著降低；肺脏组织IL-10水平在12、24、72、120 h明显低于PQ组，且在72 h和120 h时间段降低更为明显。见表2。 　　表1 不同时间段血浆中TNF-α（ng/mL）和IL-10（pg/mL）水平的比较（ n =6， x±s ） 　　注：同时间点与PQ组比较，aP0.05，bP0.0