第一节 间接法测抗体.docVIP

第一节 间接法测抗体1. 基本原理 将特异性抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，加入待检标本（含相应抗体），其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体，亦称二抗），与上述抗原-抗体复合物结合。此时加入底物，复合物上的酶则催化底物而显色。 2. 试剂与设备z 纯化抗原。z 酶标抗体（辣根过氧化物酶标记抗人免疫球蛋白）z 底物 (邻苯二胺OPD或四甲联苯胺TMB)z 底物缓冲液（Na2HPO4 0.184g +构椽酸0.047g + H2O10ml + H2O2 5ul）z PBS（见附录）z pH9.6碳酸盐缓冲液CBS（见附录）z 洗液（PBS +0.05%体积的Tween20）z 稀释液（100ml PBS + 1g牛血清血蛋白）z 终止液（２mol/L H2SO4）z 酶标板（聚苯乙烯板）z 微量加样器z 吸水纸z 封口胶带z 酶标仪z 洗板机等。3. 实验步骤一 予试验（一）抗原包被的酶标板的制备１. 以碳酸盐缓冲液将抗原稀释成适当浓度（参考：5ug/ml），加入酶标板（50ul/孔），以胶带封口，于4℃过夜。２. 弃抗原液，以双蒸水冲洗3次，自然干燥后以胶带封口。此为已知抗原包被的酶标板，备用。（二）底物浓度的摸索在底物缓冲液中加入不同量的底物（参考：5mg/10ml），加入酶标板中（