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甲状腺素（T4）测定 ——放射免疫测定 2015-11-11 目的要求 实验原理 实验步骤 注意事项 内容 2015-11-11 了解放射免疫测定（平衡法）的全过程 了解各种不同的数据处理方法 比较不同数据处理方法所的剂量反应曲线形态和不同方法所得结果的差异 放射免疫学实验的质量控制 目的与要求 2015-11-11 原理 本实验采用了第二抗体+聚乙二醇沉淀法放射免疫分析实验原理：含T4的样品和125I标记的T4与相应的抗体反应形成抗原抗体复合物。 反应后加入二抗及PEG，使免疫复合物沉淀，经离心后测定沉淀物的放射性强度，通过标准曲线得到样本中T4的浓度。 2015-11-11 实验原理 2015-11-11 实验步骤 1、按照表格分别加入标准品（A-G ） 、质控品（H\M\L）以及样品， 2、然后加入标记物，以及抗T4血清 3、混匀后，97℃水浴温育60min 4、加入分离剂 5、摇匀后，离心3000rpm，20min 6、弃去上清 7、沉淀物计数30s 2015-11-11 实验步骤步骤 T NSB A B C D E F L M H Q 样1 样2 标准品A 50μl 50μl 标准品B-F 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 质控品和样品 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 125I-T4 100μl 抗T4血清 100μl 混匀，37℃水浴温育45min 分离剂 500μl 摇匀，室温静置10-15min，3000rpm离心20min 吸去上清液，在吸水纸上拍干管内水分，计数沉淀物放射强度 2015-11-11 注意事项 T、NSB只做单管试验， H、M、L和标准品（A-G）做双管。 T管只加125I -T4,不水溶，不加抗体。 NSB只加A标准，不加抗体。 加样顺序不可颠倒。 离心后上清液应去除完全。 2015-11-11 实验结果 2015-11-11 数据处理 以标准浓度为横坐标，B/B0值为纵坐标，分别在普通坐标纸、半对数坐标纸和全对数坐标纸上作出剂量反应曲线。 以H、M、L管的值评价结果的准确性。 分别在上述不同剂量反应曲线中查出各待测样品的浓度。 2015-11-11 2015-11-11 2015-11-11 2015-11-11 结果准确性判断 SD 2SD 3SD H浓度 127.52~181.72 100.42~208.82 73.32~235.92 M浓度 80.13~97.03 71.68~105.48 63.23~113.93 L浓度 21.18~27.78 17.88~31.08 14.58~34.48 Q高 240.684 Q中 92.862 Q低 22.043 2015-11-11 原因分析 Q高两管CPM值差别较大（3912和5760）。 可能是在实验过程中跟换加样器。 加样器吸头与枪身连接不牢固导致吸样过程中漏气。 Q高两管不在同一时间测量，导致放射性125I衰减较多。 2015-11-11 临床意义 T3和T4是判断甲状腺功能的重要指标 增高常见于甲亢 减低常见于甲减，或低T3、T4综合症 2015-11-11 * * * *
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