52014植物呼吸强度的测定教案.pptVIP

实验步骤 6 平衡15min后，将压力计闭臂（右）液柱调到150mm处（零点），读取开臂（左）读数为初值； 关闭三通活塞并计时，振荡15分钟； 再将闭臂液柱高度调至零点，记下开臂读数为终值。 然后打开三通活塞，重复以上操作(1-3)进行第二次测定，求其平均值。 同时记录温压计的读数 第二次重复如果未离开水面，则不需重新平衡 1.打开三通活塞，温压平衡15min 2.闭臂调零，开臂读值(活塞打开) 3.关闭活塞，反应15min 4.闭臂调零，开臂读值(活塞关闭) 重复步骤2—4一次 实验步骤 7 实验完毕，打开三通活塞； 将压力计移到压力计架上，取下反应瓶，从中取出花芽菜 将花芽菜与另一张2×3cm滤纸放入量筒(10ml)，用排水法测取反应瓶的固相体积 呼吸速率计算 （O2 μl /克材料/小时）= 式中： h1：校正后高度（压力）差 =（测定瓶终值-初值）-（温压瓶终值-初值） K：反应瓶常数（ μl O2/mm）= 终值 终值 初值 初值 测试 对照 K：反应瓶常数（ μl O2/mm）= Vg：反应瓶气相体积(μl) =反应瓶体积-固相体积-液相体积(200 μl) T： 水槽绝对温度 Vf：液相体积=200 μl (0.2ml KOH) P0：标准大气压=10000mm (Brodie液柱高) α：待测气体（本实验为O2）的溶解度（压力=P0，温度=T时），250C时，α=0.02831 注意事项 压力计和反应瓶易碎，须谨慎使用，避免损坏； 压力计要垂直放置，不能平放在桌上； 调节液柱高度要动作缓慢； 样品大小适宜； 将碱液加入中央小井时，碱液不能与样品触及，否则会影响材料的正常呼吸。 作 业 1、如果要用瓦氏呼吸计测定呼吸系数（商）应该怎样进行？ 2、反应瓶常数K的含义是什麽？在什麽条件下它是常数？呼吸计是怎样满足这些条件的？ 下周实验内容 实验六 氧化酶活性测定 实 验 五 植物呼吸强度的测定 （瓦氏呼吸计法） 实验目的 在研究植物呼吸代谢过程中，常需要测定植物呼吸强度的变化 目前常用的较为精确的瓦氏呼吸计法（微量测压法） 除了可用以研究植物呼吸作用，还可以测定其它有关氧气、二氧化碳气体交换反应 瓦勃（O.H.Warburg，1883～1970） 生物化学家，荣获1931年度诺贝尔生理学或医学奖 上世纪20年代初他设计出一种通过氧消耗量来测定细胞呼吸速率的瓦氏测压计 用这种仪器和一种简便易行的组织薄片法结合，可以精确测定活细胞呼吸过程中生化反应的起点和终点 瓦氏呼吸计后来在细胞呼吸研究工作中得到广泛应用 判断呼吸作用强度和性质的两个指标 呼吸速率（呼吸强度）：单位时间、单位鲜重或干重植物组织释放的CO2或吸收O2的量 呼吸商（呼吸系数）：植物组织在一定时间内，释放CO2与吸收O2的量的比值。 ？ 在一定密闭的、定温定体积的系统中进行样品气体变化的测定 瓦氏呼吸计原理 气体被吸收 气体分子减少 压力降低 气体产生 气体分子增加 压力升高 气体体积变化 压力变化 计算气体变化量 测压计 压力的变化，可以在测压计上表现出来 由此，可计算产生气体或者吸收气体的数量 密闭 温度/体积不变 实验原理2 ◆在呼吸过程中，释放CO2和吸收O2是同时进行的，在压力计上观察到的压力变化是O2的吸收量和CO2释放量的总结果。 ◆当在压力计反应瓶的中央小井中加入碱液（KOH），则呼吸放出的CO2被碱液吸收，因此可由压力计(测压计)内的压力变化测出O2的吸收量。 设置对照 ◆反应瓶中压力的变化还受到环境大气压和水浴温度波动的影响 ◆所以在实验时必须有另一支压力计作温压计(空白对照)，以校正实验时环境条件变化引起的误差 实验材料 花芽菜 实验试剂 （1）10% KOH 溶液 （2）Brodie溶液 该液液柱高10000毫米时的压力=1标准大气压 实验用具 ◆瓦氏呼吸计 ◆注射器，橡皮筋，凡士林，吸水纸，移液管 测压计(系红线) 温压计(对照)共用 ◆压力计两套 瓦氏呼吸计构造 瓦氏呼吸计由两部分组成: 1.机械部分 2.玻璃制成的压力计部分 机械部分 机械部分的主要功能是为反应体系提供恒温振荡条件 机械部分：由恒温槽、回转盘、压力计架、 传动机构及底座五部分组成。 恒温槽可维持槽内的水温变化不超过±0.50C， 回转盘的四周装有压力计架。 压力计用V形套装在压力计架上。 传动装置可使回转盘作往复摆动。 底座为圆形铝铸重件，操作开关、制动伐及手柄都集中在这里。 测压计 压力计 反应瓶：底部有中央小井 旁有1-2个侧管，该侧管由棒状磨口活塞封闭。 反应瓶以磨口与U形管相接。 反应瓶 U形管 中央小井 U形管的两臂具有同样刻度，由