诺如病毒2016年培训.pptVIP

分子生物学检测方法 由于诺如病毒基因变异性很大，ORP1的基因较ORP2的基因保守性略高，因此检测所用的引物多来自ORP1，主要在RNA多聚酶区域，但即使这样也没有一对引物能检测出所有型的病毒，但这些引物对目前引起暴发的基因型基本可以检测到。 现有的检测方法包括探针杂交、逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和实时荧光PCR。 探针杂交由于过程复杂，已基本不采用，现主要采用RT-PCR和实时荧光PCR，是检测病毒检测的金标准。 检测基本过程包括RNA核酸提取、PCR扩增和产物观察。 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）：可准确、灵敏地检测标本中的诺如病毒,尤其是低浓度的感染 。该方法最大优点在于可以进一步进行病毒基因型的研究，这对于流行病学具有重要意义。 缺点：粪便中抑制PCR反应的成分多，可能影响PCR反应，造成假阴性，对此可通过稀释标本降低抑制物浓度来解决。由于诺如病毒基因变异大，目前还没有一对引物能把所有的基因型都检测出来，这也可能造成假阴性，因此如果流行病学特征明显，但检测结果阴性，应考虑换用其它引物进行检测。 采用套式PCR方法还可进一步提高检测的灵敏度，也可提高特异性。 实时荧光PCR ：特异性和敏感性较传统RT-PCR高，出现假阳性的机率也远低于传统RT-PCR，但受病毒核酸变异影响较RT-PCR大。目前国内商业化的试剂主要针对GII的病毒，因此如果检测结果为阴性不