《实验室检测技术shl.ppt

黄山德青源种禽有限公司生产技术部 1.1 水质管理对家禽生产性能的影响 水是最关键的营养物质 ，家禽的摄水量几乎是采食量的2倍 在家禽代谢中的作用： ? 体温调节 ? 食物的消化 ? 废物的排泄 水是家禽有效生产的最基本因素 水中微生物能够影响肠道内的微生物菌群 肠道微生物菌群的作用： . 维护肠道健康 . 抵制疾病 . 生产性能和效益 . 利润率 . 食品安全 影响水质的重要因素： 细菌和其他微生物 矿物质 pH值 水线卫生状况 水质监测 目前我们所检测的细菌总数的含量标准cfu≤100/ml；大肠≤1/ml 保证最优水质的步骤： 第一步：检测 测定水中的细菌数量（总细菌数和大肠菌）；测定水的pH值；测定水的硬度；测定水中矿物质含量 我们每个车间都应做的工作｛ 有效控制微生物的含量 1、氯化处理 2、使用碘液消毒 3、臭氧消毒 4、过氧化氢消毒 5、酸化处理 1.2大肠菌群及沙门对家禽的影响 所谓总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在-----条件性致病菌 大肠杆菌（escherichia coli）一般不致病。但致病性大肠菌株能引起食物中毒。致病性菌株能侵入肠粘膜上皮细胞，具有痢疾杆菌样致病力：如腹膜炎、坏死性肠炎等。 沙门氏菌对种鸡场的危害 家禽沙门氏菌感染可以分为两种类型：一种是直接危害家禽健康的沙门氏菌感染（雏鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌），另一种是危害人类健康的沙门氏菌感染，即副伤寒沙门氏菌，如：肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌。 肠道中的沙门氏菌即可经肠系膜淋巴结和淋巴组织进入血液引起全身感染，甚至死亡。如鸡白痢沙门氏菌，主要侵害雏鸡，引起败血症，可造成大批死忙。在成年母鸡则主要引起卵巢炎，可在卵黄内带菌而传给幼雏。 造成经济和声誉的双重损失 1.3 药敏试验 1 、 常规检测：平板凝集试验、琼脂扩散试验（AGP)、血凝试验（HA）、血凝抑制试验（HI）。 2 、 酶联免疫吸附试验（ELISA)。 定义 血凝（HA）：某些病素或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝，也称直接血凝反应。 血凝抑制（HI）：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞的表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触，这时红细胞的凝集现象被抑制，称为红细胞凝集抑制反应，也称血凝抑制反应。 抗原：凡能刺激机体产生抗体，并能与抗体结合而发生反应的物质成为抗原。 适用范围： 适用于对鸡新城疫(ND)，禽流感(AI:H9、H5(H5-4、H5-5)亚型)，鸡减蛋综合症(EDS)抗体滴度的检测。 判定标准： 1.ND：育雏育成鸡在6以上，产蛋鸡在8以上 2.H5：育雏育成鸡在5以上，产蛋鸡在7以上 3.H9：育雏育成鸡在6以上，产蛋鸡在8以上 注：在实际生产中，则以实际免疫程序进行分析抗体滴度值的高低。 免疫后抗体规律一般活疫苗免后7-10天产生抗体，2-3周抗体到达峰值，可以维持1-2个月灭活疫苗免后10-15天产生抗体，3-4周抗体到达峰值，可以维持3-4个月对H5抗体要求7—11 log2，低于6log2时及时免疫H9抗体在8--11 log2，当最低抗体为7log2时及时免疫H9单苗ND抗体在8--12 log2产蛋鸡最低值7log2补苗 2.2 ELISA抗体检测操作规程 酶联免疫吸附试验是免疫酶技术应用最广的一种，是继免疫荧光技术和放射免疫技术之后发展起来的又一种免疫酶技术，目前广泛用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。 ELISA分为竞争ELISA、夹心ELISA、间接ELISA，我们现在检测的主要是间接ELISA。 间接ELISA：一般用于抗体的检测，将已知抗原包被于固相载体上，加入含有特异性抗体的被检血清，再经洗涤后加入酶标二抗，洗涤后加底物，底物分解，出现变色，用酶标仪测出它的吸光值 1 原理 1.1 使抗原或抗体结合到固相载体表面，并保持其免疫活性。 1.2 使抗原或抗体与酶结合成酶标抗原或抗体，并保持抗原或抗体的免疫活性和酶的活性。 1.3 酶标的抗原或抗体与相应的抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶催化底物形成水解、氧化或还原反应，形成有色物质，其颜色深浅与标本中抗原或抗体的量直接相关。 特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位 三、活苗病毒含量的测定（EID50）及无菌检验 活苗病毒含量的测定 鸡胚半数感染剂量（EID50，50% egg infections dose）是指能使50%鸡胚感染的