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- 2017-06-10 发布于北京
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实验二 普通光学显微镜的构造原理及使用方法几种特殊显微镜的构造原理及使用方法细胞形态结构与几种细胞器的观察
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实验目的
熟悉普通光学显微镜的主要结构和基本性能。
掌握低倍镜、高倍镜和油镜的正确使用方法。
初步了解光学显微镜的维护方法。
在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构,掌握生物绘图的方法。
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实验原理
详见讲义
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几种特殊显微镜的使用
实验目的:
了解相差显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜的原理、构造以及应范围广泛;掌握这几种显微镜基本的操作步骤。
实验要求:
了解普通光学显微镜的构造及其原理,并熟练掌握其操作方法。具备一定的物理学光学知识。
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一、相差显微镜
实验原理:
人的眼睛只能感觉光波的波长(颜色)和振幅(亮度)的变化。活的细胞和未染色的标本多为无色透明,光波通过时,光波和振幅并不发生变化,因而,常采用固定和染色等各种理化措施,使被检物体的颜色和亮度发生变化,以利识别。另一方面,即使是近于无色透明的细胞和标本,各部分的折射率和厚度也会有微小的差异。当光波通过时,在各部分的滞留时间就会不同,即光程会有微小的不同,因而光波的相位会发生微小的变化。
人眼不能识别相位的差异,但相差显微镜能够将相差变为振幅(明暗)差,从而使我们可以利用相差显微镜直接观察活细胞或未染色的标本的细微结构。
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相差显微镜将相位差转变振幅差,是利用了光的衍射和干涉现象。
光源射出的光线通过被检物体时,如果是完全均质透明的物体,光线将继续沿直线前进,称为直射光;如果是含有折射率略有不同的物体,一部分仍为相位和振幅相同的直射光,另一部分由于光的衍射现象则向周围侧方分散前进,这种光称为衍射光。衍射光速度比衍射光大约低1/4波长。当直射光和衍射光同时到达一点时,两者相互干涉,形成合成波。合成波的大小取决于两个光波的振幅和相差。如果振幅相等,相差为零,即波峰与波峰相遇,其合成波则有两倍的振幅,产生的相长干涉(同向量),最为明亮。若一个光的相位推迟,其合成波减小,光度渐暗,当恰好推迟半个波长(1/2)时,即波峰与波谷相遇,则两个光波的振幅相互抵消,合成波发生相消干涉(异向量),则成为黑暗状态。
在普通光学显微镜中,尽管光波通过被检物体后也发生了衍射,直射光与衍射光也发生了干涉而形成合成波,但因衍射的速度比直射光大约低1/4(而不是1/2或0)波长,所以合成波的振幅与直射光的振幅相同,即被检物体与背景间不能形成明暗反差,我们很难看到被检物体。
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若在直射光的通过点放置推年迟相位的物质,将直射光推迟1/4波长,使之与衍射光保持
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