分光光度计2009-9辩析.pptVIP

显示输出装置 低档分光光度计现在已都使用数字显示，有的还连有打印机。现代高性能分光光度计均可以连接微机，而且有的主机还使用带液晶或CRT荧屏显示的微处理机和打印绘图机。 有的还带有标准软驱，存取数据更加方便（例如SPECORD 200）。 分光光度计光路原理图 光源切换镜 石英卤素灯 氘灯 滤色盘 场镜 入口 球面反光镜 基准 转换镜 旋转镜 电机 螺环镜 样品室 凹形全息光栅 出口 分光光度法在生化实验中的应用 分光光度计除用于常规的吸光度测定和吸收光谱的扫描外，常用的分光光度法还有导数分光光度法、催化动力学分光光度法和差示分光光度法等。 在生化实验中主要用于氨基酸含量的测定、蛋白质含量的测定、核酸的测定、酶活力测定、生物大分子的鉴定和酶催化反应动力学的研究等。 相对浓度、分子构象、反应过程记录等等。 NAD 和 NADH吸收光谱的对比 三、Helios仪器特点 采用全息母光栅（不是复制光栅）， 可获得优异的光学性能和耐久性，即使在高吸光度3A下也能保持线性。 采用步进马达单色器，配合Hatten Modulator 调制器，使得无论是高速扫描还是低速扫描，其扫描曲线完全重合（没有峰值）。 真正的双光束，光束能量比为样品/参比=80/20，可获得良好的信噪比。 标准软盘，存取方便，方便计算机的应用。 主机功能 SCAN：测定吸收值和吸收峰 FIXED：在一固定波长下的吸收值 QUANT：浓度测定（以一标准作参照） RATE：一定时间范围内吸收值的变化曲线。 存盘 配件功能 连续进样分析：加流动池配件（SUPPERSIPPER） 打印：配打印机 计算机控制：配计算机 核酸解链分析：配核酸解链配件（水浴+温控） 酶动力学：温控装置。 操作步骤 开机预热：电源在机器后面。 在HOME 主页上选择功能，用箭头（机子右下角）选择，确定后按ENTER，再进一步用箭头，光标和ENTER选，直到所有功能（参数）确定。 调零：用左右箭头选比色杯号，一般1号是对照，机子在右上角显示杯号和调零情况，按ZERO/BASE 调零，直到在右上角第一排为0.000A。 按RUN测定，进一步观测按屏幕底部的功能键。 测定结束后回到HOME页。 关电源 注意事项 选好合适的工作环境：没有阳光直射，避免静电和震动，温度一般在5—40℃之间。 打开比色池时（换样品时）要在HOME页状态下。 保持比色池内清洁，不要用腐蚀性物质。 磁盘不用时应该取出，磁盘在驱动器中不要开启仪器，否则可能会损害磁盘。 关机要在HOME状态下。 测定DNA样品的吸光光度值 开机预热 在HOME主页上选择SCAN，按ENTER键，出现在SCAN METHODS主页 参数设置： START：选择开始波长 nm STOP：选择终止波长：310nm（这两者间最少相隔4nm） BANDWIDTH：带宽，一般固定在 2.0nm 将光标移到RATIO 处，分别选择两个波长：260和280nm 调零：按ZERO/BASE 键调零，直到出现0.000A 用缓冲液做对照 测定样品在这两个波长下的吸收值 计算两者比值，如果约为 1.8，说明样品比较纯。 先回到HOME主页，再关机。 擦干比色池。 Helios 特性演示 谢谢！ σ读法:[sigma] [ `sigma ] * η读法：[eta ] [eit ]艾塔 * ε读法： [epsilon]??? [ ep`silon]??? 伊普西龙 * Basic UV-Vis Theory and Applications 分光光度计的原理与应用 一、基本原理 利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱，利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法，称为分光光度法或分光光度技术，使用的仪器称为分光光度计。 分光光度计灵敏度高，测定速度快，应用范围广，其中的紫外/可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一。因此我们重点讨论紫外/可见分光光度法的基本原理、仪器构造及其在生化领域中的应用等。 电磁辐射的波长 电磁波波长的范围 Region Wavelength (nm) Far ultraviolet 10-200 Near ultraviolet 200-380 Visible 380-780 Near infrared 780-3000 Middle infrared 3000-30,000 Far infrared 3×104-3×105 Microwave 3×105-1×109 Relationship between light absorption and color 电子跃迁类型与紫外吸收波长(nm)关系 电子跃迁类型 例子