定量PCR技术原理及其应用.pptVIP

实时荧光定量PCR技术原理及其应用 杨文斌 2007 Real-time quantitative PCR A method to measure the quantity of a nucleic acid target using the Polymerase Chain Reaction (PCR) The PCR amplification reaction is monitored in every cycle as it happens (i.e. “in real-time”) The target may be DNA or RNA（CDNA)  1.荧光扩增曲线分成三个阶段：荧光背景信号阶段荧光信号指数扩增阶段平台期 2. △Rn 一个反应管经n 次热循环后，测得的荧光强度 3. Baseline是背景曲线的一段，范围从反应开始不久荧光值开始变得稳定，直到所有反应管的荧光都将要，但是还未，超出背景4.threshold 荧光阈值荧光（Rn）超过本底时的临界数值,在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般我们将荧光域值的缺省设置是3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的10 倍5. CT （cycle of threshold ）每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数  荧光定量