实验十：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察.ppt

实验八：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察 【课前预习】 实验前给小鼠腹腔注射台盼兰淀粉肉汤的目的是什么？ 实 验 目 的 1、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义。 2、掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。观察机体的非特异性免疫现象。 3．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 实 验 原 理 细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物质的方式，也是原始防御作用。随着动物界的进化，在高等动物中，则发展生成大小两类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要组成部分。 巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后进入血液到达各组织内，并进一步分化为各种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物移行，在接触到病原体或异物时，即‘伸出伪足，将之包围并内吞人胞质，形成吞噬体，继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合，形成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶等作用下，将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化的残渣排出细胞外。 在机体的免疫过程中，巨噬细胞承担着噬菌、杀菌、清除体内被损伤和衰老的细胞，以及传递抗原信息，巨噬细胞将捕获的抗原进行加工处理后，把降解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。巨噬细胞又是天然杀伤细胞（NK Cell)的激活剂，而且对B淋巴细胞的激活、增殖和分化具有调节作用。 【实验用品】 1．材料：小白鼠、1%鸡红细胞悬液 2．试剂：6%的淀粉肉汤（含台盼蓝），0.9%生理盐水 3．仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片、记号笔 实 验 方 法 1、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射5％鸡红细胞 lml/只。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固定，即可在腹部后 l／2处的一侧注射。进针勿过深，否则易损害肝及血管等，造成出血致死。腹腔注射1％鸡红细胞悬液lml，轻按小白鼠腹部，使悬液分散。 2、约20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠(右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开致鼠死亡)。 3、将小鼠置于解剖盘中，剪开腹部，把内脏推向一侧，用不装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。 4、每人取一张干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，置显微镜下观察。 5、吸取的腹腔液与 Hank’s 液1：1混合，并且滴数滴于载玻片上，37OC 温育30分钟。 6、玻片取出，用生理盐水冲洗，吹干，甲醇固定5分钟。 7、Gimasa染液染色，干燥后油镜观察。 【实验结果】 在高倍镜下可见有许多较大的圆形和形状不规则的巨噬细胞，因未染色细胞核不易见到，其胞质中含有数量不等的兰色圆形小颗粒（即吞入的含台盼兰的淀粉肉汤所形成）；还可见少量黄色椭圆形有明显细胞核的鸡红细胞，慢慢移动玻片标本，仔细观察视野中的巨噬细胞表面，有的红细胞已部分被吞入；有的巨噬细胞内已吞入了一个或多个红细胞形成吞噬泡。 巨噬细胞吞噬实验示教照片 【实验报告】 1．镜检时，你能在视野中看到几种类型的细胞？绘图说明巨噬细胞吞噬过程。 2．巨噬细胞将如何进一步处理被吞噬的红细胞？ * * 鸡红细胞 巨噬细胞 吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞 吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞 *