微生物学实验教案.doc

微生物学实验 实验项目名称和学时分配 序号 实验项目名称 学时分配 实验属性 实验类型 实验者类 别 每组人数 必开/选开 1 显微镜的使用和真菌形态的观察 3 基础类 验证性 本科生 必开 2 革兰氏染色法 3 基础类 验证性 本科生 必开 3 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 3 基础类 验证性 本科生 必开 4 微生物大小的测定及计数 3 基础类 验证性 本科生 必开 5 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 3 基础类 验证性 本科生 必开 6 土壤中细菌的分离纯化 6 基础类 综合、设计性 本科生 必开 7 菌种保存 6 基础类 综合、 设计性 本科生 必开 合计 27 说明：在上述12个实验中根据实验材料情况压缩合并成9个实验。 实验内容、要求和所用设备 实验内容 实验一 显微镜的使用和真菌形态的观察 一、[目的要求] 熟悉普通光学显微镜各部分的结构和性能。 观察真菌的基本形态。 二、[实验原理] 1.光学显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成。 2.油镜通常标有“OI”或“HI”字样，有时也有用刻一圈红线或黑线为标记的。用不同放大倍 数的目镜可使被检物体放大1000-2000倍。 三、[实验步骤]? 1.调节光源 2.低倍镜观察 3.高倍镜观察 四、[实验报告] 1.实验结果 绘出所观察到的真菌形态，并注明物镜放大倍数和总放大倍数。 2.思考题 根据你的实验体会，谈谈如何根据所观察微生物的大小选择不同的物镜进行有效观察。 实验二 革兰氏染色法 一、[目的要求] 了解革兰氏染色的原理；掌握革兰氏染色的方法。 二、[实验原理] 根据革兰氏染色反应的结果，可将所有细菌分为两类：呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示； 三、[实验步骤]（插片法） 1.涂片 2.固定 3.染色 4.干燥 5.镜检 四、[实验报告] 1.实验结果 报告所观察到的两种细菌革兰氏染色的结果并绘图。 2.思考题 1.革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？ 2. 革兰氏染色成败的关键在哪一步？为什么？应如何掌握？ 实验三 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 一、[目的要求] 1.? 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 2.? 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、[实验原理] 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 三、[实验步骤]（美蓝水浸片观察） 1.挑菌（0.1%吕氏美蓝溶液） 2.加盖片 3.镜检 4. 用0.05%吕氏美蓝溶液重复上述实验。 四、[实验报告] 1.实验结果 （1）绘出所观察到的酵母菌的形态特征。 （2）说明观察到的吕氏美蓝溶液浓度和作用时间对死、活细胞数的影响及其原因。 2.思考题 五、[实验报告] 1.实验结果 绘出所观察到的放线菌的形态特征。 2.思考题 酵母菌与细菌在形态大小、细胞结构、繁殖方式上有何区别？ 实验四 微生物大小的测定及计数 一、[目的要求] 1学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。增强微生物细胞大小的感性认识。 2.明确血球计数板计数的原理 3.掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。 二、[实验原理] 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定在显微镜下，借助于特殊的测量工具—测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 三、[实验步骤] 1.目镜测微尺的标定 2.菌体大小的测定 3.用毕后处理取出目镜测微尺，将目镜测微尺和镜台测微尺用檫镜纸檫试干净，放回盒内保存。 4.稀释 5.镜检记数室 6.显微镜记数 7.清洗血细胞记数板 四、[实验报告] 1.实验结果 将测得的菌体大小值填入表中。 2.思考题 若目镜和目镜测微尺不便，只改用不同放大倍数的物镜测定同一菌体时，其测定结果是否相同？为什么？ 3.根据你实验的体会，说明用血细胞记数板的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？ 实验五 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 一、[目的要求] 1. 明确培养基的配制原理。 ??? 2.通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基