12味中药对灵芝菌液体培养的影响.doc

12味中药对灵芝菌液体培养的影响 摘 要 观察中药对灵芝菌液体培养中生物量和胞外多糖的影响。采用将12味中药的水提取液 分别加入培养基中接种培养,培养7d后测定生物量和胞外多糖。结果显示,板蓝根、茵陈、垂盆草3味中药能增加灵芝生物量和胞外多糖量;丹参、半枝莲、苦参对灵芝多糖没有大的影响,而对生物量有明显地增加;虎杖、黄芩、甘草、金银花、白花蛇舌草和连翘6味中药对生物量的增加有一定程度地抑制作用。 关键词 中药,灵芝,液体培养,多糖 灵芝是一味传统中药,具有很好地增强 体质,抵御疾病的作用。现代研究证明,灵芝 中所含的灵芝多糖和灵芝酸类物质能增强机 体的免疫力,有抑制肿瘤,抗病毒,保肝和抗 衰老作用[1~7]。为了定向地强化灵芝的疗 效,我们将中药加到灵芝液体培养基中,观察 灵芝对中药成分的转化作用和中药成分对灵 芝菌丝体生长及代谢产物的影响。文中初步 研究了12味中药对灵芝菌液体培养的影响, 观察中药对灵芝菌生长和灵芝多糖产生的促 进或抑制作用。 1 材料与方法 111 材 料 灵芝菌:江南大学生物工程学院保存的 菌种。 种子培养基:葡萄糖20 g/L,玉米粉10 g/L,麸皮粉5g/L。 基础培养基:葡萄糖40g/L,蛋白胨4g/ L,MgSO40175g/L,KH2PO4115g/L,VB110 mg/L。 中药材:购自无锡禾山药业集团。 112 方 法 11211 药汁煎制 称取中药材(已切片),加适量水浸泡1 h,在电炉中煎熬,调整适当的加热速度,保持 温和的沸腾状态。煮沸30min,倒出药汁,补 加适量冷水于药渣中,再煮沸20min,倒出药 汁。合并药汁,用8层纱布过滤,药汁用于灵 芝液体培养。 11212 接种培养 将药汁倒入250mL三角瓶中,加入基础 培养基,溶解。121e灭菌30min。冷却后接 入灵芝液体种,接种量10%。摇瓶条件:三 角瓶250mL,装液量80mL,温度30e,转速 150r/min,培养时间为7d。 11213 生物量计算 将培养液离心,沉淀用水洗2次,再离 心,沉淀在105e烘干至恒重,称重得生物 量。 11214 胞外多糖计算 将经离心所得的发酵上清液合并,减压 浓缩到发酵液体积的2/5~3/5,加95%乙醇 至乙醇含量为30%,在冰箱中静置24 h。离 心,弃去沉淀,上清液再加95%乙醇至乙醇 含量达到60%,在冰箱中静置24 h。离心, 沉淀用60%乙醇水溶液分散,再离心,弃去 上清液,以此法清洗沉淀去除沉淀中夹带的 少量单糖和低聚糖。沉淀洗2次。再次离心 后的沉淀用蒸馏水溶解并定容到25 mL,然 后用苯酚硫酸法测多糖含量。 38 食品与发酵工业 Food and Fermentation Industries Vol129 No132 结 果 211 中药对生物量的影响 21111 不同品种中药影响的比较 培养基中分别加12味不同的中药,接种 培养后所得生物量如表1所示,其中的对照 样为在不添加中药的基础培养基培养的结 果,其他条件相同。由表1可见,加黄芩、虎 杖、连翘、金银花、甘草的样品生物量比对照 样低得多,说明这些中药对灵芝菌的生长可 能存在抑制作用;板蓝根、丹参、半枝莲、垂盆 草样品的生物量比对照样高得多,说明这些 中药对灵芝菌的生长可能有一定的促进作 用。 表1 中药对灵芝的生物量的影响 对 照R1isatidisH1artenisiaeScopariaeR1salviaeMiltiorrhizaeH1scutellariaeBarbataeR1sophoraeFlavescentisH1sedi 中药用量 @102/g#mL-10 1215 1215 1215 1215 1215 1215 生物量@102/g#mL-11178 3131 1191 2155 2130 2111 2151 R1 scutellariae Rhizoma polygoni Cuspidati Fructus forsythiae Flos lonicerae H1oldenlandia Diffusa R1glycyrr hizae 中药用量@ 102/g#mL-11215 1215 1215 1215 1215 1215 生物量@102/g#mL-10119 0134 0148 0158 1116 0123 注:R1isatidis:板蓝根;H1artenisiaeScopariae:茵陈;R1salviaeMiltiorrhizae:丹参;H1ScutellariaeBarbatae:半枝莲;R1 sophoraeFlavescentis:苦参;H1sedi:垂盆草;R1scutellariae:黄芩;Rhizoma polygoniCuspidati:虎杖;Fruct