实验二 植物核酸的提取-教案.docVIP

授课教师 学生人数 55 课 题 实验二 植物基因组DNA的提取 授课类型 新授课 授课方法 讲授、演示 教学用具 多媒体 教学目的 掌握CTAB法提取植物基因组DNA的原理与方法 教学重点 理解每一步实验操作的目的 教学难点 实验操作过程中的一些注意事项 教学过程 背景知识 1.DNA在细胞中存在的位置？植物细胞DNA存在的位置和动物细胞有何不同？（图） 2.DNA的存在形式 双螺旋结构图 双螺旋结构组成 染色体是怎样形成的？ 一级结构（核小体=双螺旋+组蛋白）-二级结构（螺线管）-三级结构（超螺线管）-四级结构（染色体） 真核生物基因组DNA是经过四级包装形成了染色体，先是DNA形成双螺旋结构，再与组蛋白形成核小体（一级结构），压缩7倍，再形成螺旋管（二级结构），压缩6倍，之后再形成超螺旋管（三级结构），压缩40倍，最后超螺旋管压缩形成染色体（四级结构），再压缩5倍，正常细胞中基因组DNA是以染色质（相当于一级结构）形式存在，在细胞分裂的中期以染色体形式存在，真核生物细胞质DNA主要是以裸露的环状DNA形式存在，没有核小体结构。 3.遗传物质核酸除了DNA外还有另外一种，即RNA，它与DNA在结构上的区别？（图） RNA基本单位中间的五碳糖是核糖，含氮碱基尿嘧啶（U）替代 胸腺嘧啶（T） 4.核酸的理化性质 （1）形状：DNA为白色类似石棉样的纤维状物， RNA的纯品呈白色粉末或结晶。 （2）溶解性：一般都溶于水，不溶于乙醇、异丙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。 （3）保存：在酸性溶液中，核酸易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。 二、实验目的 1.掌握CTAB法提取植物基因组DNA的原理 2.CTAB法提取植物基因组DNA的实验方法 三、实验原理 1.核酸在细胞中的存在方式， 是以核酸-蛋白质复合物的形式存在，如一级结构核小体（图）：DNA螺旋+组蛋白 2.通过低温研钵破坏植物细胞壁 3.加入CTAB溶解细胞膜，CTAB与核酸形成核酸-CTAB复合物，使核酸与蛋白质分离。 4.加入高盐溶液溶解核酸-CTAB复合物，加入蛋白质变性剂使蛋白质变性沉淀出来，离心除去蛋白质。 5.加入核酸沉淀剂，溶解CTAB，并使和核酸沉淀出来，离心得到核酸沉淀。 四、实验仪器 1.水浴锅 2.离心机（12管）：3台 3.研钵：10个 4.移液枪（包括枪头）：1ml、400ul 五、实验材料与药品 实验材料：新鲜菠菜叶片 1.十六烷基三甲基溴化铵（CTAB） 作用：溶解细胞膜并与核酸结合，便于分离核酸。 商品信息：瓶装/100g。 理化性质：白色或浅黄色结晶体至粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水,震荡时产生大量泡沫化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。有吸湿性，在酸性溶液中稳定；溶于10份水，溶于热水、乙醇、三氯甲烷,易溶于异丙醇水溶液,微溶于丙酮,不溶于乙醚和苯储存在阴凉，干燥，通风良好的地方，远离不相容的物质。高毒对皮肤及粘膜刺激性小，有轻微脱脂作用无色澄清Tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺激性的化学物质。：毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。 作用：螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制脱氧核糖核酸酶（DNase）活性，活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。无味无臭或微咸的白色或乳白色结晶或颗粒状粉末。溶于水，不溶于乙醇、乙醚其水溶液pH值约为5.3。可由EDTA与氢氧化钠和碳酸钙作用制得。储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。应与氧化剂分开存放，切忌混储。配备相应品种和数量的消防器材。储区应备有合适的材料收容泄漏物。危害：