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氯氰菊酯降解菌的分离鉴定及其降解特性研究 录入时间:2010-12-14 9:48:15 来源：中国论文下载中心 【摘要】 目的 分离得到能高效降解氯氰菊酯的菌株。方法 采用选择性培养基从农药厂的污泥中进行富集和分离筛选高效菌株，并且用16S rDNA序列分析法和其生理生化特征对其进行鉴定。结果 该菌株鉴定为克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.)，命名为Klebsiella sp.J2（登录号为AY989899），菌株J2能以氯氰菊酯为唯一碳源进行生长，降解氯氰菊酯的最适温度是35 ℃,最佳pH是7.0。结论 菌株J2是一株能高效降解氯氰菊酯的菌株。 【关键词】 氯氰菊酯；克雷伯氏菌；生物降解　　　　Abstract:Objective To isolate a bacterial strain J2 capable of degrading cypermethrin from sludge of a pesticide manufacturer.Methods Adopting selective culture to screen and isolate the cypermethrindegrading strain from the samples and identifying the strain by using the 16S rDNA sequence analysis and its taxonomic characteristics. Results This bacterial strain was identified as Klebsiella sp. named J2.It could grow with cypermethrin as sole source of carbon .The optimal temperature and pH of cypermethrin degradation by the organism were 35 ℃ and 7.0.Conclusion The bacterial strain J2 effectively degrade cypermethrin. 　　Key words:cypermethrin；Klebsiella sp. J2；biodegradation 　　随着20世纪80年代无机盐农药和有机氯农药的相继禁用，菊酯类农药已发展为我国现阶段使用最广泛的农药之一，由于具有广谱、内吸、触杀等高效杀虫特性，因此广受农业生产者欢迎。但是，大量使用引起的农药残留不仅造成环境与食品的污染，而且影响农产品的质量及人们的身体健康。农药残留及其废水的降解主要有微生物降解、化学降解和光降解等方式。与其他的降解方式相比，微生物降解具有操作简单、降解彻底、无二次污染等优点。因此利用微生物技术处理农药残留，并对受污染的土壤与水体进行生物修复是一种行之有效的方法。目前对有机磷和有机氯等农药的微生物降解的研究比较多，而关于菊酯类农药的降解研究较少。本文从农药厂的污泥中采集土壤样品，筛选分离到一株能高效降解氯氰菊酯的菌株（J2），并对其进行筛选、鉴定及降解性能的初步研究［13］。 　　1材料与方法 　　1.1培养基 　　富集培养基（1 L）：蛋白胨10 g、NaCl 2.0 g、KH2PO4 1.5 g、葡萄糖1.0 g、dH2O 1 000 mL，pH值7.0；经115 ℃，灭菌20 min。基本培养基（1 L）：NH4Cl 1.0 g，KH2PO4 0.5 g，K2HPO4 1.5 g，MgSO4 0.2 g，NaCl 0.5 g ，加入氯氰菊酯作为唯一碳源，浓度视需要添加。LB液体培养基（1 L）：蛋白胨 10 g，酵母提取物 5 g， NaCl 5 g，pH值7.0（固体加2%的琼脂粉）。 　　1.2实验试剂 　　氯氰菊酯（质量分数95%）原药和标准品（质量分数99.9 %，色谱纯）购自成都化学试剂公司；Taq DNA聚合酶与各种限制性内切酶均购自大连宝生物；3S DNA Gel Purification kit V3.1 购自上海申能博彩生物科技有限公司；PCR引物由上海博亚合成；pMD18T载体试剂盒购自大连宝生物。 　　1.3降解菌株的富集和分离 　　将采集的农药污染土样配制成15%的悬浮液，以5%的接种量接到含25 mg/L氯氰菊酯的富集培养基中，并加适量玻璃珠，37 ℃、160 r/min振荡培养。待菌长出后，取1 mL菌液接入同样培养基中37 ℃培养，传代过程中氯氰菊酯的浓度逐步增高至300 mg/L,大约2 d传代1次。将富集的农药降解菌菌液用无菌水作10倍梯度（