花粉生活力测定.docVIP

湖 北 生 物 科 技 职 业 学 院 课　　时　　教　　案 讲 授 人 张薇 课　　时 学时 序　　号 课题内容 实训一 花粉生活力的测定 教学时间 设计思路 先讲后做，了解花粉生活力贮藏及生活力的测定方法和原理。 教学目标 知识目标：掌握花粉生活力测定的意义和测定方法 能力目标：会进行花粉生活力的测定 素质目标：培养学生的团队精神和动手能力 教学重、难点 及解决办法 教学重点：花粉生活力测定的原理和意义。 解决办法：通过多媒体结合案例讲解后学生动手操作，教师指导。 教学方法及手段 演示、学做 教学准备 多媒体课件、植物花粉、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、 20min 教学内容 指导实训 蔗糖琼脂培养法 学生练习思考 90min 教学内容 指导实训 染色法 学生练习思考 45min 教学内容 检查实训内容的掌握 记录实训结果完成实训报告 25min 教学反思 湖北生物科技职业学院教案附页 一、花粉生活力测定的意义 在园艺植物有性杂交工作中，常因杂交亲本间花期不遇，或父本植株栽在异处 (地)而必须预先收集花粉。花粉贮藏在低温(0～4℃)、干燥(相对湿度0～40％)、黑暗的环境下，可以较长时间地保持花粉生活力，但其贮藏期长短对花粉生活力的影响因品种而不同。在授粉之前，对贮藏的或外地采来的花粉必须预先测定花粉的生活力，以确定哪些花粉不能用于杂交，这对取得杂交效果有直接影响。载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器将花粉播种在特定的培养基上，并在一定的环境条件下来测定其发芽能力的方法。培养基常用蔗糖、琼脂(1％)和蒸馏水配制而成。不同植物的花粉，对蔗糖浓度要求不同，一般柑桔花粉要求25％左右，苹果和梨10～15％，桃10％左右为宜。蔗糖浓度高低可调节培养基的渗透压，以防止花粉在培养基上破裂。培养基以微酸性为宜，一般在pH5.2～6之间。发芽温度在20～25℃左右，并需要空气和湿度，为了促进花粉发芽，在培养基中还可加入少量的硼酸和维生素B1。 (-萘酚都是还原剂，但他们被氧化后却都表现红色或玫瑰红色。如果花粉是活的，那么这个反应很快，则花粉被染成红色或玫瑰红色；如果花粉是死的，则这一反映迟迟不能进行，花粉也就保持原色。此色优点是比较快捷，但比较间接。 利用化学药剂染色的方法测定花粉生活力，这是一种间接的测定方法，简便而快速，但比较粗略，有时不能真实反映出有发芽力花粉的数量。 四、实训步骤 1.蔗糖琼脂培养法 （1）培养基的配制在100ml的蒸馏水中，加入琼脂1g蔗糖10～25g(因植物花粉种类而异)，置于烧杯中加热煮沸，然后将该烧杯置水浴锅或盛热水的杯中备用，以防培养基冷却凝固适于羽衣甘蓝花粉萌发的蔗糖浓度为150g/L，硼对促进羽衣甘蓝花粉萌发的作用最大，适宜的浓度为20mg/L（2）发芽床的设置和播撒花粉在盖玻片上滴一滴培养基，用蘸上花粉少许，均匀撒于培养基表面，但应防止花粉埋入培养基中而影响花粉发芽。播撒花粉后，要在显微镜下检查花粉是否分布均匀，再将载玻片置入用湿纱布或湿滤纸垫底以保湿的大培养皿中，盖上皿盖。在各载玻片上贴上标签，注明花粉种类、采集时间、蔗糖浓度、播粉时间和操作者，然后置于2～2℃的温箱中。 （3）播花粉后的检查在播花粉后，根据不同植物，经不同时间，在显微镜下检查花粉发芽情况。3～4后检查每次检查个视野，统计花粉总粒数和发芽粒数花粉发芽以其花粉管伸长超过花粉直径为标准本实验人一小组，每，每片观察个视野，每视野约有100粒花粉，统计每种测定方法中具有生活力花粉的百分率，将观察结果记入。①原理凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反应。因此，当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成三苯基甲(TTF)而呈红色。 ②试液的配制 Ⅰ.磷酸盐缓冲液在100ml的蒸馏水中，溶解0.832g的Na2HO4·2H2O和0.273g的KH2PO4，调整pH值为7.17。 Ⅱ.TTC溶液称取0.02～0.05g的TTC，溶解在10ml的磷酸盐缓冲溶液中，放入棕色滴瓶内，置于暗处。TTC为有毒性物质，操作时应注意安全。 Ⅲ.步骤和方法取少量花粉放在载玻片上，在花粉上滴1～2滴的配制液，用镊子使其混合后，盖上盖玻片。将此载玻片置于人工气候箱中(35～40℃)约15～20。在显微镜(100倍)下观察，凡具有生活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力的和不育的花粉粒表现无色。 过氧化物酶测定法 ①原理具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶，它能使过氧化物放出活性氧，氧是在花粉萌发，进行许多综合反应时必需的，使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生特定颜