细菌的革兰染色法课件.pptVIP

实验二、细菌的革兰氏染色 一、实验目的 1. 掌握细菌革兰氏染色原理及方法、巩固油镜的使用； 2. 初步掌握无菌操作技术。 二、实验原理 革兰氏染色法（Gram, 丹麦，1884年） （1）是细菌学上最常用的鉴别染色法，染色后，可将细菌分为G+菌和G-菌。 （2）机理 主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。 G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（90％）、交联程度高、肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色； G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（10％）、交联程度低，肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。 四、实验方法 1.革兰氏染色 （1）步骤 取一干净载玻片→→在两端各加一滴生理盐水→→无菌操作取菌种→→涂于生理盐水中（成菌膜） →→自然干燥→→火焰固定→→初染（结晶紫，1min） →→水洗→→媒染（碘液，1min） →→水洗→→脱色（乙醇，20-30s） →→水洗→→复染（蕃红，2min） →→水洗→→自然干燥→→观察。 五、实验作业 1.分别绘出枯草杆菌和大肠杆菌的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的结果。 * * 三、实验材料 1.菌种 （1）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） （2）大肠杆菌（Escherichia coli） 培养24h，用于革兰氏染色。 2.染色液和试剂 草酸铵结晶紫染液、卢革氏碘液、95%酒精、番红染液、生理盐水、乙醚-乙醇溶液、香柏油。 3.器材 废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。 革兰氏阴性杆菌 革兰氏阳性杆菌 （2）注意事项 选用对数期的细菌； 载玻片要洁净无油迹； 涂片时，滴生理盐水不要过多，挑菌量宜少，涂片要均匀，菌膜宜薄； 酒精脱色：是革兰氏染色成败的关键，要求脱至流出的乙醇不带颜色为止，立即水洗。